贝类三种组织血抗原elisa检测方法的建立与季节变化规律研究.pdf

贝类三种组织血型抗原 ELI SA检测方法的建立与季节变化规律研究 摘 要 起非菌性急性肠胃炎的主要病原体，包括多种形态相似和基因型多样的亚型。 型。据统计，在美国诺如病毒每年大约引起2300万例胃肠炎病例，占所有食源 性疾病的50％．67％。研究结果表明人类组织血型抗原(histo．blood group 诺如病毒或者与GI或GII的重组诺如病毒(rNvLP)的8种代表性的结合模式。 HBGAs是复杂的碳水化合物，分布于红细胞表面以及呼吸道、生殖道黏膜和消 化道上皮细胞表面，同时也以游离低聚糖形式存在于唾液、肠内容物、乳汁及 血液等体液中。HBGAs的表达是由多基因系控制的，I卫wis血型系统、分泌型 和ABO血型系统是三种主要的人体HBGAs系统。 NoVs引起的胃肠炎往往与食用了受NoVs污染的生的或未烹饪完全的双 壳贝类有关，尤其是牡蛎。双壳贝类是高风险的食物，因为它们是滤食性动物， 很容易从污染的海水中富集大量的病毒粒子。研究表明重量为lkg的双壳贝类 每小时可以滤食90L的海水。目前贝类富集NoVs的机理还不是十分确定，但 富集过程涉及到机械性的包埋，包括直接化学键、范德华力、氢键以及其他形 式的离子键。人类胃肠细胞上的HBGAs被认为充当了病毒粒子的受体。所以， 我们假设，牡蛎中也可能存在类似的HBGAs并且特异性的富集NoVs。人类的 ABO血型系统已经研究的比较清楚，在其他物种中类似的ABO碳水化合物抗 原也有了报道。 本论文利用人组织血型抗原单克隆抗体，研究建立了贝类中A、H型和B型 HBGAs的ELISA检测方法。通过设置阳性和阴性对照，以P／N值作为判断阳性的 依据和贝类含量差异的定量标准，对我国六种贝类中的HBGAs进行了检测和分 型，探究了不同城市不同季节的贝类中HBGAs的表达差异情况。主要研究结论 如下： 检测方法确定的主要条件为：包被浓度和包被时间分别为lg：3mL、2h，单克隆 抗体的工作浓度和反应时间为1：1200、1．5h，二抗的反应条件为37℃孵育2h； B型HBGAs的ELISA检测方法确定的主要条件为：包被浓度和包被时间分别 为lg：4mL、lh，单克隆抗体的工作浓度和反应时间为1：400、1．oh，二抗的反 应条件为37℃孵育1．5h。 2、检测了我国9个沿海城市6种贝类中的HBGAs的类型。对2011年不同 季节从大连、烟台、威海、青岛、日照、连云港、舟山、厦门、广州等9个城 市采集的8l份牡蛎、65份缢蛏、77份菲律宾蛤仔、57份紫贻贝、72份毛蚶、 69份扇贝等贝类样品进行了检测。结果显示上述六种贝类中都检测出A型抗 原，其中菲律宾蛤仔的检出率为11．6％(9／77)，紫贻贝的检出率为28．1％(16／57)， 有检测的牡蛎和毛蚶样品都含有A抗原；只有牡蛎样品检出H抗原，检出率为 和77．8％(56／72)。 3、初步分析了我国6种贝类中HBGAs随季节的分布规律。在舟山、厦门和广 州这三个南方城市中，牡蛎样品A抗原在10月．12月份的含量比较高；其中， 舟山缢蛏样品A抗原平均水平较高；舟山和广州的扇贝样品A抗原含量从7 月份到12月份呈现逐渐增加的趋势，在大连、烟台、青岛、日照这四个北方城 市中，6月份左右含量较高；在大连、烟台、威海、青岛、日照这五个北方城 市中，毛蚶样品A型抗原冬季其含量较低，其最高的阶段出现在夏季，在三个 南方城市中，11月和12月份的含量相比其他月份都较高。 本论文建立了贝类中三种HBGAs的ELISA检测方法，分析了6种双壳经 济贝类中的三种HBGAs的类型，结果显示贝类中的HBGAs不止一种类型，该 研究结果拓展了对双壳贝类表达HBGAs的认识，为贝类富集诺如病毒机理的 研究奠定了基础，并初步探索了不同贝类中组织血型抗原随季节表达的规律， 为预防NoVs疫情暴发提供了参考。 关键词：贝类；组织血型抗原；诺如病毒；酶联免疫吸附测定；季节规律 II I．shmentofELI SAmethodfordetecti onof Estab threeofHBGAsi nsheI I fi shand ofseason