rebaudiside-a分离纯化新工艺研究.pdf

摘要 摘要 Rebaudioside．A是甜菊糖苷混合物中所含苷类的一种，与所含的其它糖苷相 含量越高，甜味越纯正，且甜菊糖苷被广泛用于医药、食品饮料等领域，因此， 研究提高甜菊糖苷产品中Rebaudioside．A的含量有着非常重要的意义。 本文以甜菊糖苷作为研究对象，先利用超声波辅助酶法从甜叶菊中提取甜菊 糖苷，并通过正交试验优化提取条件；然后将甜菊糖苷作为原料，利用硅胶柱 层析的方法分离出Rebaudioside-A，同样用正交试验优化分离条件，从而找到最 优分离条件；之后又将甜菊糖苷先通过结晶法分离出Rebaudioside．A，然后用大 孔吸附树脂对母液中的甜菊苷和Rebaudioside．A组分进行分离纯化。得到的相 关结论如下： (1)通过单因素实验及正交试验对提取条件的优化，结果显示：在液料比 (V／W)为12，提取溶液pH为4．5～5．5，酶的质量浓度为0．15％，超声时间为 80min，提取温度为60℃，以及超声功率为50W的条件下，合并四次提取液， 得到甜菊糖苷的提取率为12．9％。与传统的提取法相比，超声波辅助纤维素酶提 取甜菊糖苷的方法既缩短了提取所需的时间，也降低了提取所需的温度，从而 节省了能耗。 (2)提取液的除杂过程中，用脱色率和甜菊糖苷的损失率来确定复合絮凝 剂硫酸铝钾和氧化钙的用量。结果表明，当硫酸铝钾与氧化钙的用量比为1．4：1 时，提取液的脱色率最大，提取液中甜菊糖苷的损失率较小。 脱过程中是否加压以及洗脱剂种类进行初选实验，结果表明：甜菊糖苷与硅胶 的拌样、洗脱时加压以及二氯甲烷与甲醇按一定比例混合的洗脱剂对分离 Rebaudioside．A影响较大。之后对甜菊糖苷的上样量、上柱的硅胶量、洗脱剂的 配比及洗脱过程中的流速进行单因素实验和正交试验，经分析，当上样量与硅 胶量的比例为1：17．5，洗脱剂二氯甲烷与甲醇的配比为3：2，流速为60滴／min 条件进行放大实验，所得的结果很接近，可靠性好，并且也得到了纯度高达为 摘要 95．1％的Rebaudioside．A。 般甜菊糖苷经结晶后，母液中还含有Rebaudioside．A和大量的甜菊苷。本实验 的洗脱速度下进行洗脱，可得到纯度为93．8％的甜菊苷且收率为78．5％；另外， 可得到纯度为90．5％的Rebaudioside．A，但收率却很低。 关键词：Rebaudioside-A；甜菊糖苷；硅胶柱层析；大孔吸附树脂 II Abstract ABSTRACT Rebaudioside-Aisa whichis ofsteviol glycoside part glycosides，andcompared of totheother sweetnessisabout350-450timessucrose containingglycosides，its hasfoundthat ofrebaudioside—Ais andno it thecontent higher, bitterness．Nowadays thesweettasteis steviol has usedinthefieldof purer,andglycosideswidely and hasa to medicine，food veryimportantsignificance bev