副溶血弧菌噬菌qdvp001的分离鉴定及其在牡蛎净化中的初步应用.pdfVIP

副溶血弧茵噬菌体qdvp001的分离鉴定 及其在牡蛎；争化中的初步应用 摘要 副溶血性弧菌(所6，．fD p日，砌P聊D砂fc甜s)为革兰氏阴性菌，广泛存在于近海岸 的海水、海底沉积物及鱼类、贝类等海产品之中。该致病菌主要感染对象有对虾、 海水鱼类、文蛤和牡蛎等，此类病菌给企业的渔业生产带来巨大的经济损失，对 海水鱼类规模化养殖和发展造成了巨大的威胁。而弧菌致病菌不仅对水产动物造 成威胁，同时也是引起人类食物中毒的主要因素，特别是沿海省份，近年来由副 溶血性弧菌引起的食物中毒高居微生物性食物中毒首位，在其发生规模及人群暴 露规模上呈明显上升趋势。人类食用大量污染了副溶血弧菌而又未经良好加工处 理的水产品后会引起食物中毒，其症状主要表现为急性起病、呕吐、腹痛、腹泻 及水样便，直接影响着人类的健康。 为了探索行之有效的控制水产品养殖环境中的副溶血弧菌的方法，本研究以 副溶血弧菌Vpl7802为宿主菌，从水产市场的污水中分离纯化出一株强裂解性 噬菌体qdvp001，并研究了其生理生化特性及其在生物防治中的应用，为噬菌体 应用于贝类净化奠定了基础。 研究结果如下： 1以副溶血弧菌Vpl7802为宿主菌，采用双层琼脂平板法从污水样品中分离 得到一株噬菌体，命名为qdvp001，经液体或固体增殖法增殖后该噬菌体的效价 较高，能达109pfu／ml以上。噬菌斑呈圆形，中心清亮，边缘隐约有晕环，噬菌 体效价高，体外裂解能力强，是一株具有特异性强裂解性的噬菌体，可以为后续 工作提供良好的试验材料。 2对噬菌体qdvp001的生理生化特性进行测定，结果表明：该噬菌体对热的 稳定性较高，对60*C以下的温度耐受力较强，而对70。C及其以上的高温非常敏 感，在此温度下噬菌体基本上被灭活；对pH值的适应范围较宽，在pH值4～ 12内能保持较高的裂解活性，最佳pH值在8左右；最佳感染复数为O．0001，感 min。 染宿主菌的潜伏期约为20min，裂解期约为70 3电镜观察显示，该噬菌体头部呈正二十面体，直径大约为79nm，尾长大 约1 示出一条主要区带和四条次要区带，即至少含有五种结构蛋白，其中主区带结构 蛋白的相对分子质量约为35KD；通过基因组测序和NCBI的同源性分析结果显 示，qdvp001与其他噬菌体的同源性较低，所以是一种新发现的噬菌体。 4将该噬菌体应用于牡蛎的初步净化试验，发现其对牡蛎养殖环境中和牡蛎 体内的副溶血弧菌均具有净化作用。作用72h后，可以将养殖环境中含量为1．0 量级，而添加噬菌体后牡蛎体内副溶血弧菌的数量也明显下降。 总之，本试验分离得到的噬菌体qdvp001是一种新发现的噬菌体，它的裂解 能力较强，对理化因素的耐受力较强，并且对牡蛎养殖环境及体内的副溶血弧菌 具有明显的清除作用，为噬菌体应用于贝类净化的可行性提供了理论支持。 关键词：副溶血弧菌；噬菌体；生物学特性；分类鉴定；牡蛎净化 I SOI ati denti fi cati onandreI i mi nar I i cati on on，i p yapp ofbacteri ophage hostedVibrio qdvp001 ． ． ● ●一● icusi n r rl TI GatI On Oystepu parahaemo／yt Abstract Vibrio kindof existsin parahaemolyticus，a