宫颈癌预防性疫的研究.pdfVIP

宫颈癌预防性疫苗的研究 博士后：周玉柏 导 师：曾 毅 院士 北京工业大学生命科学与生物工程学院 (北京市朝阳区平乐园100号，100124) 摘 要 宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第二，在一些发展中国家甚至居于首位， 全球每年大约有50万新发病例，约20万人死于宫颈癌，其中80％的死亡病例发 生在发展中国家。大量研究显示，生殖道HPV的持续感染与宫颈癌的发病密切相 最为常见，流行病学调查显示，除上述两型外，HPV33及HPV58的感染在我国 宫颈癌患者中也很常见。因此，在宫颈癌病因学研究的基础上研制宫颈癌预防性 疫苗己成为现阶段控制宫颈癌的最经济、有效的方法。 在众多候选疫苗中，基于重组腺病毒及重组腺病毒伴随病毒的病毒载体疫苗 以及HPV HPVl6、18、6、11L1 ● 获得FDA批准上市。然而，国内在该领域的研究相对滞后，因此，本文拟从上述 两个方向进行宫颈癌预防性疫苗的研究。我们首先按照哺乳动物密码子的偏好在 系统及三质粒共转染法成功构建了含密码子优化型HPVl6L1基因的重组腺病毒 和滴鼻(i．n．)途径进行单针及与联合免疫C57BL／6小鼠，并通过假病毒颗粒体外 中和实验在初免后4个月期间分次检测各组小鼠血清中抗HPVl6中和抗体的水 可诱导特异性血清中和抗体，与滴鼻组相比，肌注组血清中和抗体出现早，滴度 高，在第12、16周仍保持稳定；联合肌注组抗体滴度在初免后第8周与 (P0．05)；联合滴鼻组在初免后第16周中和抗体滴度显著高于各重组病毒单独 滴鼻组(P0．05)，显示了一定的免疫增强作用，但抗体滴度仍显著低于联合肌注 组(P0．05)。从小鼠免疫结果来看，重组腺病毒载体虽然可通过初免．力口强模式 诱导高滴度的血清中和抗体，但其单针免疫效果不理想。 病毒样颗粒疫苗的研究方面，我们首先按照酵母细胞密码子的偏好对野生型 HPVl6、18、33、58L1基因进行了密码子优化和合成。随后，我们将优化型L1 基因分别克隆至酵母表达载体中，在酵母细胞中进行小量表达，通过超速离心法 对病毒样颗粒进行了初步纯化，结果显示，密码子优化型HPVl6、18、33、58L1 基因在酵母细胞内可以有效表达，表达的L1蛋白可以在胞内形成病毒样颗粒结 构，这为HPVl6、18、33、58L1VLP四价疫苗下一步的产业化研究奠定了坚实 的基础。 关键词：宫颈癌，预防性疫苗疫苗，病毒载体，病毒样颗粒 4 Studieson vaccinescervicalcancer prophylacticagainst Postdoctor：ZhouY-ubai Yi，Academician Supervisor：Zeng ofLifeScienceand College Bio—engineering；BeijingUniversity ofTechnology； 1 00 1 Beijing00022；China(No．1Pingleyuan,Chaoyang00052，China) District,Beijing Abstract Cervicalcanceristhesecond ofcancer women cause deathin