富铬酵母高产菌选育及发酵工艺的研究.pdfVIP

摘 要 GTp(GlucoseTolerance Factor)是一种能维持动物机体中葡萄糖水平正常、 治疗和预防糖尿病的有效活性物质。富铬酵母是GTF的重要来源，通过筛选和诱变等 方法能够得到性质优良的产GTF的富铬酵母菌株，对其发酵条件进行优化分析，能够 充分发挥富铬酵母菌株产GTF的能力，达到高效生产GTF的目的。因此，我们对富铬 酵母菌株的筛选诱变及其摇瓶和高密度发酵的工艺条件进行系统研究，为高效生产 GTF提供理论和实践依据。 本研究主要从富铬酵母菌株的筛选，离子注入诱变选育高产富铬酵母菌株，富铬 酵母发酵动态规律的研究及富铬酵母高密度发酵动态规律的研究等这4个方面进行 研究。 通过富铬酵母的平板初筛，从11支供试菌株中筛选得到10株都能够在铬离子含 量为5．125 g／L的YEPD固体培养基中生长良好的高耐铬性酵母菌株；经过含铬发酵 复筛，从中得到一株相对高产高效生产GTF的酵母菌株YS-3，该菌株具有良好的传 代稳定性，可以作为诱变育种的出发菌株。 通过分析离子注入剂量与富铬酵母存活率之间关系的剂量一效应曲线，确定了在 50key注入能量下最适N+注入剂量为4×2．6×10m ion／cm。在此条件下对YS一3进 行旷注入诱变，筛选得到1株有机铬含量提高了17．59％的富铬酵母菌株YSI-3．7， 且其具有较好的遗传稳定性。通过对YSI-3．7的二次离子注入诱变处理，得到了生物 2266．50±2．77腿／g的优良酵母菌株YS2I一3．2，且其具有一定的遗传稳定性。 通过对YSI一3．7发酵条件的单因素试验和正交试验及经济性分析得到了最佳的 发酵条件组合：发酵温度28℃，接种量1096，摇床转速200r／min，发酵时间30h。 铬离子的加入对YSI一3．7菌体的生长能够产生明显的抑制作用；在种子液中加入 铬离子，提高了有机铬含量，降低了生物量；在发酵初期加入铬离子，能够得到较高 的生物量和有机铬含量；在发酵24h向发酵液中补充加入1．559／L的铬离子能够提高 有机铬富集量，降低了菌体的生物量，其有机铬提高的程度大于生物量的降低程度， 因此可以用于GTF的高效生产中。在葡萄糖消耗速率较高的发酵阶段补充发酵培养基 使生物量和富集的有机铬含量都下降。 ／100mL、有机铬含量为3l 18．27腿／g；在发酵14h补充加入培养基能够获得较高菌体 生物量，但是有机铬含量较低。 关键词：葡萄糖耐量因子(GTF)；富铬酵母菌；离子注入诱变； 发酵条件；高密度发酵 andFermentation Studieson ofFineStrains Screening ConditionforChromium—richYeast Abst ract Tolerance anactive canmaintainGlucose GTF(GlucoseFactor)is substance，which levelofthe or diabetes．Chromium·richisthemainsource body,andtherapyprevent yeast findthe Chromium·richstrains and ofGTF．Wecan better yeast byusingscreening it’sfermentationconditions．Inthis callobtained mutation,then