海藻渣中岩藻聚硫酸酯的提取、纯化及其体外活性研究.pdfVIP

摘 要 岩藻聚糖硫酸酯是褐藻中一种十分重要的硫酸多糖，具有抗病毒、抗凝血、抗氧化 以及调节免疫等广泛的生物活性。海带（Laminariajaponica）和巨藻（LessoniaNigrescen） 常作工业原料，其工业藻渣中含有丰富的岩藻聚糖硫酸酯。本文以海带和巨藻藻渣为原 料，确立了海藻渣中岩藻聚糖硫酸酯的高效制备技术，对所得岩藻聚糖硫酸酯进行了分 级纯化，研究了其化学组成及其体外抗氧化和PTP1B抑制活性，其研究结果如下： 1、利用单因素实验、响应面分析法和均匀试验设计，建立数学模型及回归方程； 比较了氯化钙水提法、超声波辅助酸提法和普通水提法的最佳提取条件下，岩藻聚糖硫 酸酯的提取率及化学成分；确立了超声波辅助提取法为海藻渣中岩藻聚糖硫酸酯最优高 效制备工艺为：温度90℃，超声70min，水浴2h，料液比1:80，pH=6。 2、在最佳制备工艺下，分别提取了海带和巨藻藻渣中的岩藻聚糖硫酸酯，对其进 行化学组分分析和分子量测定。海带LF提取率为4.49%，巨藻NF提取率为3.69%；LF 富含硫酸根而NF岩藻糖含量较高。高效液相色谱分析表明，初步纯化后的LPF和NPF 的单糖组成发现LPF 的岩藻糖和半乳糖摩尔比为1.03:1，半乳糖和岩藻糖含量均较高， 此外，还含有葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和少量鼠李糖、木糖；NPF 以岩藻糖为主， 其次鼠李糖和甘露糖含量较高，此外，含有半乳糖和木糖和少量葡萄糖，未检测到葡萄 LPF NPF 142KDa 136KDa 糖醛酸。 和 的高效凝胶色谱测定，分子量分别为 和 。 3、比较了氯化钙纯化法和乙醇纯化法，乙醇较氯化钙法所得岩藻聚糖硫酸酯得率 较低，但所得岩藻聚糖硫酸酯纯度较高。纯化后LPF和NPF与未纯化粗品LF和NF相 比，总糖和岩藻糖含量均有提高，但硫酸根含量降低。 4、经过DEAE-SepharoseFF 阴离子交换柱层析纯化LPF和NPF后，分别得到三个 组分，其化学组成和单糖构成均有差异，L1 的葡萄糖摩尔比例较高，此外，还含有甘 L2 露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和少量的鼠李糖和木糖； 中半乳糖含量相对最高，其他 单糖也均有检测出；L3单糖组成相对简单，半乳糖和岩藻糖含量较高，未检测出甘露 糖和木糖。N1葡萄糖含量较小，以岩藻糖为主；N2 中甘露糖和葡萄糖醛酸含量较高， L3 N3 未检测出鼠李糖； 和 单糖组成相似。 5、岩藻聚糖硫酸酯体外抗氧化能力表明，LF和NF均有良好的清除超氧阴离子自 由基、清除羟自由基和还原力。LF和NF清除50%超氧阴离子自由基所需浓度(EC )分 50 1.564mg/mL 1.506mg/mL LF NF 别为 和 。 体外总体抗氧化能力优于 。 6、岩藻聚糖硫酸酯及其分级组分对PTP1B 的活性抑制较好，浓度为20μg/mL 时， LF及其三个级分均有抑制活性，抑制率均在50%以上，其中LF抑制率最高为89.15%； NF N1 N2 N3 N3 95.87% 和 无活性， 、 活性较高， 最高为 。 关键词：海藻渣；岩藻聚糖硫酸酯；化学组成；抗氧化；PTP1B抑制 I Abstract Fucoidan, an important sulfated polysaccharide in brown seaweed, has many bioactivities, such as anti-virus, anticoagulant, antioxidant and immunomodul