L脯氨酸配体交换色谱和四唑基亲合色谱固定相的制备及其色谱性能.pdfVIP

摘要 溶质在液相色谱中的分离是在色谱柱中实现进行的，其分离效果与固定相的 性能和流动相的性质密切相关。因而，关于固定相的制备，溶质、固定相和流动 相相互作用机理的研究一直是色谱领域的热点研究问题。本论文在对国内外有关 配体交换色谱和亲合色谱研究成果分析的基础上，试图对配体交换色谱的手性拆 分进行新的理论探索，并设计合成出一类新型四唑基固定相。全文包括以下三个 方面的研究工作： 1．研究了a．氨基酸对映体在L．脯氨酸配体交换色谱固定相上的分离，考察 了流动相pH值、盐浓度、金属离子浓度及温度对溶质保留和分离选择性的影响； 并应用计量置换保留模型对配体交换色谱流动相中盐浓度对溶质保留的影响进 行了新的探讨。 2．以Fmoc保护的亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸为原料合 成了五种新型的四唑类化合物；将苯丙基四唑脱保护后，键合于硅胶表面，合成 出了一种新型四唑配体固定相，并螯合上Zn2+，初步研究了该固定相对蛋白质的 分离性能和pH值对蛋白质保留的影响。结果表明，该固定相对蛋白质具有一定 的分离能力。 3．采用固相合成方法j在硅胶表面上直接生成四唑配体，建立了一种新的 合成四唑基固定相的方法。与先合成四唑化合物，再将其键合于硅胶表面的合成 路线相比，该方法具有操作简单、省时等优点。研究了蛋白质在固定相上的色谱 行为和pH值对蛋白质保留的影响。结果表明，在螯合和未螫合Zn2+的四唑固定 相上，4种标准蛋白混合物均能碍到良好分离。且质量回收率大于93％1蛋白质 在这两种情况下的分离分别属于螯合色谱和亲合色谱分离模式。另外，当四唑固 定相螯合Zn2+后，蛋白质的保留时间普遍增大，而且选择性与裸柱明显不同，说 明了该固定相不仅可以应用在生物大分子的分离纯化中，而且可以通过螯合金属 离子，在同一固定相上实现蛋白质的选择性分离。 关键词：配体交换色谱，亲和色谱、四唑 of andtetrazole—based stationary PreparationL-proline phase andtheir chromatographicproperties ABSTRACT within The in wasachievedthe ofsolute chromatography separation liquid the ofsolutewas related column,andseparation closely chrommographic efficiency tothe andmobile of preparation propcrtyofstationaryphase phase．Consequently，the mechanismbgt3Ⅳcenthe andtheinteraction solute，stationaryphase stationaryphase research inthefieldof andthemobile have thehot topics