普通毒理方法学研究进展创新.pptVIP

* Free template from * 背景 Draize 实验本身存在的许多问题,如实验评分主观性强,结果重复性差,因种属间差异而影响其结果应用于人体的可靠性等,使人们质疑动物实验的预测能力,而且近40 年来国际动物保护和动物福利运动的兴起,特别是近20 年,不再以动物模式为基础的毒理学研究系统和评价方法已被广泛接受,欧盟甚至制定法规来禁止销售采用动物做实验的产品和原料,推动着动物实验替代方法研究的快速发展。 * Free template from * 背景 与此同时,组织细胞体外培养技术和生物组织工程技术等现代生命科学技术以及计算机模拟统计分析技术的不断进步与完善,拓宽了替代方法的研究领域,加快替代方法的验证和应用。国内外科学家在发展科学可靠的皮肤刺激反应实验替代方法方面进行了大量探索. * Free template from * 皮肤刺激动物实验替代方法 皮肤刺激动物实验替代方法 体外细胞培养 皮肤组织培养 重组人皮肤替代物 皮肤角质形成细胞培养 皮肤成纤维细胞培养 人皮肤组织块体外培养模型 非灌注猪耳朵实验 体外小鼠皮肤完整功能实验 EpiskinTM (聚碳酸酯滤器) EpiDermTM (醋酸纤维素滤器) SkinEthicTM (胶原凝胶) * Free template from * 体外细胞培养的优缺点 体外细胞培养模型有着很多的优点,如模型制作以及实验操作相对简单、方法重现性好、冷冻保存相对容易,然而,单层细胞培养存在着不少的缺陷,最重要的是模型缺乏完整皮肤的一些重要的特征,如表皮细胞排列紧密、表皮选择性渗透屏障以及皮肤不同细胞类型之间的相互作用,不能模拟正常人的皮肤。而且,因为缺乏角质层的屏障作用,化学物对细胞产生直接的细胞毒性,使细胞模型呈现高敏感性。 * Free template from * 体外细胞培养的优缺点 所以,单层细胞实验所获得的结果一般难以用来解释体内情况或与体内情况相联系。此外,模型要求受试物必须溶于培养液且性状不能影响指标的测量,从而限制了模型广泛应用于各种不同的化学物。但是,鉴于现有的许多模型比细胞培养系统费用要更加昂贵,大多数科学家仍认为细胞培养系统是一种有用的皮肤刺激物的筛选工具。 * Free template from * 皮肤组织培养的优点 科学家从正常人或动物身上获取完整的皮肤组织块,因为组织块具有正常的结构和所有的细胞成分,因而能很好地模拟真实的体内情况。将皮肤样本置于网格或特制的培养板上以防止细胞生长超出离体的组织,同时培养于空气-培养液界面,既可以模拟现实皮肤解剖结构,又可以直接局部应用受试物,且不受受试物性状的限制,与真实暴露情况一致,可广泛应用于检测各种不同的化学物。 * Free template from * 皮肤组织培养的缺点 但是,研究发现皮肤组织培养仅适用于短期染毒,因为组织体外存活的时间很短。离体皮肤组织在气液界面培养超过3 d 后,皮肤细胞会逐渐出现细胞变性,同时,伴随着各种蛋白质分化标志物的表达和表皮脂质成分的修饰,以及角质层屏障功能损伤,极大地影响模型的预测能力,从而限制模型的广泛应用。 * Free template from * 重组人皮肤替代物 皮肤组织培养虽然模拟现实能力强,但鉴于其皮肤来源有限、伦理学限制以及存组织工程学的出现与发展,使体外重构有活性皮肤替代物成为现实。 * Free template from * 类型 重组皮肤替代物 表皮替代物 全层皮肤替代物 * Free template from * 重组人皮肤模型优缺点 研究表明,重组人皮肤模型具有天然组织所具有的所有的主要的特征。 然而, 皮肤替代物与正常人皮肤仍存在着相当大的差异。与正常人皮肤比较,皮肤替代物表皮屏障功能有所缺陷,主要表现为其物质角质层穿透率变化很大,比正常人皮肤高大约10～30 倍。而且,两者细胞组成不同,在正常皮肤中,尚存在着血管内皮细胞、炎症细胞以及神经组织,这些组成成分相互作用对皮肤症状的产生是必需的。所以科学家不得不采用更加复杂的参数并且多种指标相结合的方式去评价受试物的刺激性。 * Free template from * 现在常用的几种重组皮肤替代物主要包括由EpiskinTM 、EpiDermTM和SkinEthicTM ,因其呈现良好的重现性和预测能力而被ECVAM 所采纳,现已进入正式验证研究。 * Free template from * EpiskinTM(聚碳酸酯滤器) EpiskinTM (Episkin SNC , Lyon , France) : EpiskinTM是将人Ⅳ胶原薄层覆盖在Ⅰ型胶原上形成真皮类似物,将由人角朊细胞组成的复层表皮接种于真皮类似物上。Episk