力学环境对成骨胞功能状态的影响及其三维培养的研究.pdfVIP

力学环境封删胞功能状态的影响厦其鲜培养的张 。芝64曼堡墅 力学环境对成骨细胞功能状态的影响及 其三维培养的研究 (摘要) 机械应力、应变在骨的重塑中起着重要的作用，它影响成骨细胞的活性及分化已为 人们所熟知，然而，机械应力、应变如何诱导细胞内的反应，从而控制成骨细胞的分化 并维持其表型尚未完全搞清。四点弯曲加载装置可通过对细胞基底施加应变而使细胞受 到拉伸刺激，因此在我们的研究中，运用该装置对鼠成骨细胞施加生理范围内的不同应 变，观察成骨细胞在应变作用下，随着时间变化的反应过程。结果表明，两种应变条件 的活性呈现出一种先升高，后降低，再又逐渐恢复正常的过程；而I型胶原的表达则呈 u la e下加载6-12h， e及2000 现一种先增后降的过程。结合实验结果，可认为i000 促进了细胞分化，有利于骨的形成；而加载12-24h则抑制了细胞分化，不利于骨的形 成。同时，在实验中发现，立即早期基因c—fos也出现了短暂的变化，以上结果表明了 机械应变在分子和细胞水平影响着成骨细胞的活性。 虽然大量的实验表明，机械应力、应变能影响成骨细胞的活性及分化，从而调控骨 的生成与重建。然而，这些已有的研究结果只是从某一侧面对应力、应变作用下成骨细 胞的反应及骨的改建与重塑进行了探索，可还是难以解释其中复杂的生理学现象。蛋白 质组学是后基因组时代的一个新兴领域，其理论和技术的发展为研究应力、应变作用下 成骨细胞功能状态的改变提供了新的方法。本实验采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助 的图像分析技术，对应变作用下成骨细胞与未加载成骨细胞蛋白质进行分离和比较分 析。结果显示，未加载的成骨细胞可分离512_+11个蛋白点，加载后的成骨细胞可分离 533+14个蛋白点。有9种蛋白质在应变作用下发生了明显和稳定的质和量的改变，其 中2种在应变作用后降低，7种在应变作用后表达增高。这些差异表达的蛋白质可能在 成骨细胞对应变的反应中起着重要的作用，对于信号转导的进一步研究也很有帮助。 本文还探讨了通过成骨细胞三维培养，在体外构建组织工程化骨的可行性。运用骨 片组织培养法，分离培养Wistar大鼠乳鼠的成骨细胞，传至第三代后，与珊瑚—羟基 力学环境对成骨细胞功能状态的影响及其三维培养的研究 的成骨潜能。结果发现成骨细胞和CHA支架材料有良好的生物相容性，在RCCS中，成 骨细胞一CHA复合物培养至第14天时，CHA明显促进了细胞的增殖，ARS染色呈弱阳性 反应，同时，ALP的分泌减少。这些结果表明CHA材料和RCCS可以为成骨细胞提供皂 好的生物学环境，三者联合运用有希望成为构建组织工程骨的理想方法。 关键词成骨细胞，应变，蛋白质组，双向电泳，珊瑚-羟基磷灰石， 旋转式细胞培养系统，三维培养 Ⅱ 垄兰堡苎翌堕曼塑璺婴壁苎查塑丝堕墨苎三丝些苎塑塑塞 !竺型 of Effectthestrainto the functionofosteoblast Andit’S three．dimensionalculture (Abstract) It iswell that mechanicalstrain a crucial in recognized plays role bone and activitiesdifferentiationof