利用cDNA-FLP技术鉴定小麦磷胁迫诱导基因.pdfVIP

摘 要 磷素是作物必需的大量无机营养元素之一，是核酸、磷脂和ATP等生命大分子的重要组成成 分。在我国，1/2以上的农田土壤表现为明显的缺磷现象，磷素供应不足已成为限制作物生长、产 量形成和改善品质的重要因素之一。提高小麦对磷素的吸收和利用效率，对于推动农业的可持续 发展具有重要意义。 本项研究针对迄今有关小麦应答低磷胁迫特异表达基因研究较少的现状，以磷高效小麦品种 石新828为材料，采用cDNA-AFLP技术和生物信息学技术，鉴定了小麦在不同供磷水平以及不同 低磷处理时间下的特异表达基因。主要研究结果如下： 1、采用水培法培养了石新828正常供磷水平（2 mM Pi ）和低磷处理(20 µM Pi) 1 h、3 h、6 h、 12 h、24 h 、48 h 、72 h和96 h幼苗。提取了高质量含有应答低磷转录本的根系总RNA 。 2 、选用240 对引物组合，对正常供磷水平和低磷处理不同时间点根系转录本进行cDNA-AFLP 分析。在获得的 2500 个左右有效扩增的基因片段中，得到 70 个重复再现的特异表达基因片段 （TDFs ）。对上述TDFs 的PCR 扩增、克隆和测序，得到52 个片段长度多为100~450 bp 的TDFs 。 3、克隆并获得序列的52 个TDFs 中，包括未能在GenBank 比对出同源序列的TDFs 6 个， 比对出同源序列但缺少生物学功能的TDFs 22 个，已知可能生物学功能的TDFs 24 个。 4 、研究表明，已知生物学功能的24 个TDFs 分别归属于信号转导、转录调控、代谢、发育 和逆境响应类别。应答低磷逆境的信号转导TDF 为Ndr （TDF83-1 ）；转录调控基因为4 个转录 因子基因（2 个锌指蛋白转录因子TDF47-1 和TDF106-1 、1 个bHLH 转录因子TDF106-2 及 1 个 亮氨酸拉链转录因子TDF66-3 ）、1 个RNA 结合蛋白基因（TDF59-3 ）和1 个多腺苷特异切割因 子基因（TDF98-1 ）；代谢基因为GDP 解离抑制因子（TDF5-1 ）、丙酮酸激酶（TDF66-1 ）、DNA 聚合酶 V 家族成员（TDF59-2 ）、核迁移蛋白（TDF80-2 ）、CENP-E 着丝粒蛋白（TDF102-1 ）、 乙酰辅酶A 氧化酶（TDF95-2 ）、辅酶Q 细胞色素c 还原酶（TDF94-1 ）和环化酶相关蛋白（TDF43-1 ）； 发育基因为 1 细胞壁松弛蛋白基因（TDF95-1 ）和 2 个纤维素合成酶相关基因（TDF102-2 和 TDF81-2 ）；逆境响应基因为应答盐分胁迫逆境（TDF79-2 及TDF80-3 ）、低温逆境（TDF68-1 ）、 非生物逆境诱导（TDF82-1 ）、白粉病侵染诱导（5-2 ）和赤霉病菌侵染诱导（TDF81-1 ）。 5、研究表明，小麦在生理生化和植株形态学对低磷胁迫逆境的响应和应答，在分子水平上 是特定信号转导和转录调控指导下的细胞代谢、发育和逆境响应和抵御等综合作用的结果。本研 究鉴定的不同功能类别应答低磷逆境基因，在增强磷高效品种石新828 对低磷逆境响应和改善该 品种在低磷胁迫下的磷效率中可能具有重要作用。 关键词：小麦（Triticum aestivum L. ）；低磷胁迫；cDNA-AFLP 技术；特异表达基因；基因功能 及类别 Identification of Differential Expresssed Genes Induced by Low-Pi Stress Based on cDNA-AFLP Approach Author ：Bao Jin-xiang Major: Crops cultivation and farming system Supervisor: Prof. Xiao Kai Abstrac