槲皮素金属配合抗肿瘤作用及其与dna相互作用的机理研究.pdf

St u d y o n M ech a n ism o f Tu m o r C ellA P o P to sis In du ced by Q u ercetin M etalC om P lexes an d In tera ctio n o f C o m P lex es w ith D N A A T h e sis S u b Iul tted to C h o n g q in g U ni v er sity in P a r tia l F u lfillm en t o f th e R eq u ire m en t fo r th e D eg r ee o f D o cto r o f E n g in eer in g b y Ta n J u n S u P erv iso r :P ro f.W 妞n g B o ch u M ajor :B iom edieal E n gin eerin g C o lleg e o f B io en g in eer in g o f C h o n g q in g U ni v er sity，C h o n g q in g ，C h in a . S eP tem b er，2 0 0 7 ⑥ 2 00 7 1’an J u n 中文摘要 摘 要 恶性肿瘤现 已成为人类死亡 的主要原 因之一 ，寻找抗肿瘤 药物 己经成为药学研 究 的重大课题 。近年研 究表 明某些榭皮素金属配合物不但抗氧化活性 比棚皮素强 ， 而且其抑制肿瘤细胞生长 的作用也 比棚皮素强 。然而 目前榭皮素金属配合物抗肿瘤 的作用机制还不清 楚 。它们 能否诱导肿瘤细胞凋亡 ，其信 号转导通路 ，作用靶 点等 科学 问题还有待探索研究 。本课题利用生物化学 、细胞生物学 、药学 、计算化学等 多学科交叉手段 ，主要研 究 了棚皮素金属配合物 (M n 、C O 、Ni 、C u 、Zn ) 对肿瘤 细胞凋亡 的影 响，及其与 D N A 结合和催化 D N A 断裂作用 ，探讨 了棚皮素金属配合 物诱导肿瘤细胞凋亡 的作用机制及其与 D N A 相互作用 的机理 。得到 了如下结论 : ① 采用 M TT 法 、荧光染色法 、流式细胞术和免疫细胞化学方法对棚皮素金属 配合物抗肿瘤活性和诱导 H ePG Z 细胞凋亡进行 了研究 ，初步探讨 了棚皮素金属配合 物诱导肿瘤细胞凋亡 的分子机制 。 l) 结果表 明棚皮素金属配合物 (M n 、C o 、N i、C u 、Zn ) 对肝癌细胞 H epo Z 、 SM M C 一7721 和肺腺癌细胞 A 549 的生长均有 明显 的抑制作用 ，并呈 明显 的剂量和 时 间依赖性 。其 中棚 皮素锰 、镍和锌配合物对肿瘤细胞生长 的抑制作用 明显强于配体 棚皮素 ，它们作用于 He pG Z 细胞 48 小时的半数抑制浓度 Ic50分别为 20 .64 、14.44 和 lo.67umo lL·一’，而棚皮素 的 Ic50为 33.69林m olL·一，。 2) 形态学观察结果表 明 H ePG Z 细胞经棚皮素锰 、镍和锌配合物处理后 ，染色 质凝聚 ，且有 明显 的凋亡 小体 出现 ，表 明棚皮素锰 、镍和锌配合物 能诱 导 H ePG Z 细 胞 凋亡 。 3) 细胞周期分析 结果表 明棚皮素锰 、镍和锌配合物对肝癌 H ePG Z 细胞 生长 的 抑制作用可 能是通过使细胞 阻滞于 G 夕G l期 ，使细胞 D N A 合成速度 降低 ，细胞周期 的循环被抑制而 实现 的。对 G 声 1期细胞 阻滞可 能是配合物诱导 H ePG Z 细胞凋亡 的 一个重要机制 。 4) 免疫细胞化学检测 结果表 明榭