利用花粉管通道将轮状病毒vp7基因转化番木瓜的研究.pdfVIP

摘 要 今，对轮状病毒感染最有力的预防和控制措施，仍是发展有效的疫苗。VP7是轮状病毒 的主要外壳蛋白和中和抗原，是发展基因工程疫苗的首选。研究表明，将细菌性和病毒 性病原体抗原的编码基因导入植物细胞，能够表达出较好保留天然免疫原性的抗原，这 为利用转基因植物生产疫苗提供了良好的基础。因此，将VP7基因导入番木瓜，获得具 有免疫原性的轮状病毒植物口服疫苗，将为防治轮状病毒引起的小儿腹泻提供新型疫 苗，具有潜在的社会和经济意义。 转基因植物中的除草剂或抗生素抗性标记基因的生态环境和食用安全性一直颇有 争议，无选择标记策略提供了解决抗生素或除草剂等标记基因所引起疑虑的一种新思 路。 采用正交试验观察导入外源DNA类型、DNA浓度、DNA注入时间三因子对番木瓜花 粉管通道法转基因在座果率、成株率、转化率的影响，并对转基因植株进行VP7基因、 NPTII基因的PCR检测和RT-PCR、Westelmb10t、ELISA等一系列分子生物学鉴定。 结果表明： 化上对坐果率、成株率和转化率三方面的影响，DNA类型、DNA浓度、DNA注入时间的最 供体性状能够表达的前提下，选择10Kb以下的小DNA片段；DNA注入时间选择在授粉后 u 第5天；DNA浓度控制在1000 g／ml。坐果率、成株率、转化率可达一个最佳综合水平。 化番木瓜。 化植株检测到VP7基因、未检测到朋可II基因。 发生转录水平的基因沉默。 在RT 株转MFpBIVP7—2植株经Western 瓜的目的蛋白表达量排第2，活性VP7蛋白占可溶性蛋白的含量为1．20‰。 5)获得了无选择标记的转卿基因番木瓜植株。 本研究为研究和开发新型轮状病毒口服疫苗及无选择标记番木瓜遗传转化提供一 条新的途径和方法，具有一定的理论意义和应用前景。 关键词：轮状病毒VP7基因番木瓜花粉管通道法无选择标记遗传转化 AbstraCt mostcomI如10ncauseofsewlre：di劬eainchildrenalloVerme R0tavimses(RV)areⅡle is outcr aIldisa c锄didateforincluSioninasllb咖血 wodd，即7 c印sidproteiIl r删0r primary 0rrecombi彻nt．AdV孤cesiIl ill也e decadehaveacceleralIedme geneticengineering past iIlfIe嘶ous foreignproteins、衍m V甜ue．Antigens丘Dm expressiolliIlplant，of pll乏眦nace而cal bacterialorViraldiseaSeshave iIlto int0 been洫们duced iIl仃oduciI培聊’7gene plants．So tO edible Vaccine me趾sof ofrotaVirIlseswould me昀ditional deVelopplant d唧ge papaya ofVacc衲es锄dnlecostof wolndbereduced is