可控酶解从海洋蛋白中制备生物活性肽的研究.pdfVIP

攘要 摘 要 本文主要以沙丁鱼蛋白为原料，利用可控酶解技术、超滤和离子交换法分离 手段，研究制备生物活性肽的方法，弗进行抗疲劳活性研究。 在可控酶解工艺优化的研究中，主要研究了pH值、水解时间、蛋白酶的种 癸和用鬣、底物的裙鲶浓度和稀类、承解温魔戮及搅拌方式对承解效粟和酶解耱 的分子擞分布的影响，实验结果如下： 萋予求解体系酶pH僮交纯对英酶解稳躲分子爨分布_j}掰簸提取率懿离低彩璃 很小，确定水解过程中不必加碱保持体系pH值的憾定。水解过程可分为三个阶 袋，分溺楚快遥上舞除段、缓慢灌长玲段稻平衡除段，胃佟瓣赢携浓凄下簿是导 致水解过程产生这三个阶段的主要原因；随祷水解时间的延长，酶解物的平均肽 链长发下降，表翡了大分子萤款缝分禽量降鬣，低分子量敦含量嚣菇。酉耱蛋鑫 酶中以胰蛋白酶的水解效果最好，其次是碱性蛋白酶和复合蛋白酶，中性糙白酶 瓣承薅效栗最差；霆秘爨叁蘩毽雳量垮戳2000U／g～3000U／g戆范嚣毙较合逶。底 物初始浓度过高，将降低水解反应速度，胰鬻白酶水解沙丁色蛋白的底物初始浓 发骥7．5镌魄较会逶；沙丁鱼蛋鑫兹拳麟效果毯子红三鱼蛋彝。壤蛋鑫酶昶碱蛙蛋 囱酶的最佳水解温度应是55℃左右，而复合磁白酶、中性蚕白酶的缀佳水解温度 委il必50℃左毫，嚣鱼蠡溶酶最佳农麓瀑废则为45℃。连续搅拌的水解效聚更佳。 怒始底物浓度、酶的种炎和底物的种袋等因素明显影响氮提取率和肽提取率与水 勰发之鲻关系。 通过数学推导及实验分析，得出可控酶解动力学模型及其相关参数，分别为： 蔽大临界底物初始浓度so=磊成，co一2．159×10一。 超滤分离方法的研究表明，酶解液的PCL和平均分子黛减小，将提高平均透 避速率、膜效能和组分的透过率，降低组分的截留率；证实了分离滕对承解液中 不同分予量组分具有分离的作用，通过二级超滤处理，酶解液可被具有不同截留 分子量的分离膜分离成三部分。 离予交换法的研究寝明，较低离子强度的初始缓冲液、合适的上样量及恰当 离子强度的洗蕊帮有稻子提离交换容熬移分离效采；鼹浓度嚣步浇魏法毒麓子疆 街分离效果，减少洗脱剂的用缀；在中性条件下，中性蛋自酶酶解液中的中性肽 莘拜带正奄旖豹获静含量浸蕊，褥胰蛋舞酶粼袋低。察验结果表骥，离子交羧法能 有效地实现酶解液中肽缀分的分离。 动纺实验滠龌，活髓获藐鬣著延长枣叁藏翡游淑辩阕，灌注致瓣裁羹与小自 华素壤工夫学工学簿±学建论文 鼠的游泳时闻呈正相关关系，低分子爨组分的对延长小自鼠游泳时阅的作用比商 分子量组分的效聚更显蔫；活髋肽能鼗著提高小自鼠煎肝糖藤贮备麓，活径肤的 剂攫与小臼鼠疲劳时的肝糖原含量呈正相关关系；低分子量组分对提升小自鼠肝 糖藤贮备麓的作掰眈高分子蟹缀分的作用显著，低分子量活住肷组分其有撼著的 促进机体物质代谢，提黼其肝糖原的贮备量的作用；活性肽熊降低疲劳小臼鼠体 内酶盔藤豢氮静含量，潇往虢的灌霉裁璧与夺盘鼠酶疲劳时的血尿素氮含蚤有负 相关关系，低分子量组分对降低血尿素氮含量的效果比高分子量组分的显蔫。低 分予量活性获稳离分子爨活瞧获都其霄抗疲劳活性，并涟羞灌胃裁蘩静提离焉增 强，低分子量活性肽比商分子量活性肽舆有更高的抗疲劳活性。 关键词：生物活1攮肽；可控酶解；动力学模型；分离纯化；抗疲劳活性 娃 Abstract Inthis on of active useof biologically by paper,studiespreparation peptides ofsardine and controlled-enzymatichydrolysis ion-exchange， protein，ultrafiltration