甘蓝转cryla8和crylba3双介bt基因的研究.pdf

摘要 结球甘蓝(Brassicaoleracea L．)是一种重要的十字花科蔬菜，在蔬菜周年供 L．var．capitata 应中占有重要地位。近年来，随着栽培面积的逐年扩大，甘蓝的虫害日趋严重，其中以鳞翅目的 小菜蛾(Plutella rapae)等为害最为严重。目前生产上害虫的防治以 xylostella)和菜青虫(Pieris 施用化学药剂为主，但化学农药污染环境、对人畜有害，且一些害虫已对多种化学杀虫剂产生了 抗药性。培育抗虫品种是防治害虫最有效的方法，但在甘蓝中抗虫资源缺乏。利用植物基因工程 技术将外源抗虫基因转入甘蓝，可为甘蓝育种提供有效的抗虫种质资源。 白对小菜蛾和亚洲玉米螟具有很强的杀虫活性，CrylBa3毒蛋白对小菜蛾、小猿叶甲和家蝇具有 菜蛾的抗性治理提供强有力的支持。 双价基因导入甘蓝高代自交系，主要研究结果如下： 1．甘蓝再生体系的优化 以4个甘蓝自交系为材料进行了再生体系的优化：苗龄控制在5d，选用下胚轴为外植体， 2 4-NAA0．1 3 激素配比为6-BA mg／L mg／L的MS培养基，并添加有AgN03mg／L时，可显著提 高不定芽的分化率，最高再生频率达到96．87％。 2．甘蓝高效遗传转化体系的建立 2 4-NAA0．1 3 化体系：当选择培养基中激素配比为6-BAmg／L mg／l_,，并添加有AgN03mg／L、 Timentin150 mg／L时能显著促进不定芽的再生，转化频率最高可达到10．42％。 3．甘蓝转crylla8和crylBa3双价研抗虫基因植株的获得 性植株；分子检测证明crylla8和crylBa3双价基因已被成功整合到甘蓝基因组中并得到表达； blot检测均 其中PCR检测阳性植株33株，Southernblot检测阳性植株27株，RT-PCR和Western 为阳性的植株有24株；抗虫性鉴定结果表明部分转基因植株不仅对敏感小菜蛾具有很强的杀虫 活性，而且对CrylAc抗性小菜蛾也有很好的控制作用。 关键词：结球甘蓝，历双价基因，遗传转化，小菜蛾，抗虫性 Abstract oleracea L．)isoneofthemost vegetables Cabbage(BrassicaL．vat．capitata important belonging in all totheCmciferae．Itan role ofthe withthe important vegetable plays supply year-around．Along of cultivationinrecent is moreandmore expansioncabbage years，cabbagedamagedbypests seriously themdiamondbackmoth(PluteUa W01T11(Pieristhe Among xylostella)andcabbage rapae)areprimary atthe i