利用病毒介导沉技术高通量鉴定马铃薯晚疫病水平抗性相关基因功能.pdfVIP

利用病毒介导沉默技术高通量鉴定马铃薯晚疫病水平抗性相关摹因功能 摘要 病毒诱导基因沉默(Virus．induced gene 的植物抗病毒防御反应机制，VIGS实验技术应用在基因功能研究和高通量基因组研 究中能够高效快速的鉴定基因功能缺失后表观性状改变。 马铃薯晚疫病水平抗性是一种由微效多基因控制的，具有非小种专化性的数量 抗性。其抗病程度虽然不及垂直抗性，但是对很多生理小种均有抗性，并且有着多 重的抗病机制，具有广谱性、持久性和稳定性，同时能够降低晚疫病生理小种的选 择压力，一定程度上延缓病原菌的变异。为了解晚疫病水平抗性的分子基础，明确 水平抗性形成过程中相关基因在抗性网络中的位置与重要性，本研究挑选马铃薯晚 疫病水平抗性相关基因，在本氏烟草利用VIGS技术沉默目标基因，对目标基因沉 默烟草进行晚疫病抗性鉴定，筛选沉默后晚疫病抗性显著降低的目标基因作为马铃 薯晚疫病水平抗性重要侯选基因。主要实验结果如下： 1．挑选晚疫病水平抗性相关基因，与本氏烟草eDNA数据库比对得到45个与 本氏烟草同源性较高，并且含有23bp以上连续匹配序列的ESTs作为实验筛选的目 标基因片段。 2．根据已知序列设计引物扩增获马铃薯eDNA，扩增获得38个目标基因片段， 构建了TRV病毒重组载体，并将其转入农杆菌GV3101。 3．在本氏烟草材料用VIGS技术将与目标基因同源性较高的内源基因进行沉 默。RT-PCR技术鉴定了部分本氏烟草内源目标基因沉默效果，确定VIGS实验体系 能够达到沉默烟草内源目标基因的目的。 4．将沉默目标基因的本氏烟草进行晚疫病抗性鉴定，筛选得到晚疫病抗性与对 照材料比较有显著差异的12个目标基因。初步确定这12个目标基因是晚疫病水平 抗性重要基因。 综上，本研究利用VIGS技术高通量在烟草中鉴定了38个马铃薯水平抗性相关 基因功能，筛选出12个可能在马铃薯晚疫病水平抗性中具有重要作用的基因。 关键词：马铃薯；晚疫病；水平抗性；VIGS 华中农业大学2011届硕士论文 Abstract Vtrus-induced all antiviral is RNA-mediateddefense genesilencing reSponse mechanismof is for a efficientand method plants．VIGStechniquerelatively quick identificationof function． high—throughput gene Potato horizontalresistancetolate iscontrolled minor blight bymultiplegenes，with and characteristic．Level lessthan race-nonspeeific ofthisresistanceis quantitative ithasresistanceof strains．Withabroad R-generesistance，but manyphysiological and horizontalresistancehas r