刺葡萄（vits davidii foex）原生质体培养及体细胞融合技术体系的研究.pdfVIP

刺葡萄(所出妇诎脚Fo芭x)原生质体培养及 体细胞融合技术体系的研究 摘 要 布于陕西、甘肃南部、云贵高原和长江流域，常生长在1500m以下的谷地、沟边或林缘。 植株强健，枝粗叶大，枝上密布直立或稍弯皮刺；穗长(20cm以上)，果大(15哪以上)， 晚熟，果皮较厚，风味稍淡，产量高，病虫害少，对白腐病、炭疽病和黑痘病抗性较强， 但对霜霉病抗性较差。有少量鲜食栽培，江西省从刺葡萄中选育出了“塘尾”、湖南农 业大学选育出“紫秋”等优良栽培品种。刺葡萄极耐阴湿，扦插不易成活，多以华东葡 萄为砧木嫁接繁殖，是抗湿热和抗病育种的重要种质资源。本文以刺葡萄为试材，对其愈 伤组织的诱导、离体培养、原生质体分离、原生质体培养、原生质体再生植株进行了研究； 以刺葡萄和玫瑰香为试材，对葡萄原生质体电融合技术体系进行了比较系统的研究，旨在 运用生物技术为刺葡萄的快速繁殖、抗性育种等方面的科学研究提供理论依据和操作技 术。研究结果如下： 1．刺葡萄愈伤组织的诱导和离体培养研究 本研究以刺葡萄的叶片、卷须、茎段、幼果、果柄为试材，以l／2Ms和Bs为基本培 养基，通过不同浓度的生长TI调节剂配比，探讨了刺葡萄愈伤组织的诱导率及继代培养 情况；以刺葡萄愈伤组织为材料，在Bs培养基上附加不同的生长TI调节剂种类及浓度配 比，探讨了刺葡萄芽的诱导、增殖和生根。结果表明：l，2MS和B5都是适合刺葡萄愈伤 组织诱导的基本培养基；诱导材料以茎段对剖的诱导率最高，以B5+2，4．D3mg· o 生长速度较快，褐变率低，仅为15％。刺葡萄愈伤组织的分化率很低，仅在B5+zT5mg· O 02 L41卜NAAO．1mg。L。1和B5+6-BAlmg·L。1十NAA0mg·L。1两种培养基上培养有少量胚状 体产生，胚状体分化成苗的能力弱，分化率最高为133％，增殖培养以B5+6．BAlOmg· omg· 4mm。 L。1+NAAO．01mg·L。培养基为好，4周平均生2．1条，根粗达2 2．刺葡萄胚·l生愈伤组织的诱导及胚性细胞悬浮系的建立 本研究以刺葡萄的小花序、花蕾、花丝、花梗、子房和幼果为试材，以B，为基本培 养基，在不同的生长T1调节剂配比和蔗糖条件下，研究其对诱导胚性愈伤组织的影响； 同时探讨其不同的继代培养次数、培养密度和震荡速度对刺葡萄胚性愈伤组织悬浮培养的 影响，并观察测定了悬浮细胞的生长情况。结果表明，小花序是刺葡萄胚性愈伤组织诱导 l～3 的良好材料，在B5+2，4．D2～3mg-L‘1+6．BAmg·L一，蔗糖浓度为lo％时，诱导率可达 93 0～1 3％；悬浮培养以继代培养1~4次的胚性愈伤组织为材料、培养密度以15：100、震 荡速度以80～loo 使愈伤组织细胞保持较高的胚性和活性。 3．刺葡萄原生质体的分离研究 本研究以刺葡萄的叶片、根尖和不同的愈伤组织为试材，经不同的酶液组合、不同酶 解时间处理，采用筛网过滤、离心收集纯化，最后测定原生质体的产量和活力。结果表明， 原生质体分离的材料以愈伤组织为佳，叶片次之，根尖较差；采用4次继代培养以内的愈 伤组织为材料、以2％纤维索酶+O．5％果胶酶+1％离析酶酶液组合，经8h酶解，可收到较 好的分离效果，原生质体产量可达j．12×106个，活力可达88．57％。 4刺葡萄原生质培养及植株再生 本研究以悬浮培养的刺葡萄胚性愈伤组织来源的原生质体为试材，研究了不同的培养 基、碳源物质、培养密度、培养方式和生长TI调节剂配比对原生质体培养的影响。结果 表明，以Bs为基本培养基，以O．45Ⅲ01．L_l葡萄糖和0．15m01．L-1蔗糖为碳源，培养密度 为5×105个．mLnl，附加2，4一Dl mg．L‘1和zTo．0