流体切应力和血平滑肌细胞诱导联合培养内皮祖细胞的分化及p-akt的调控作用.pdfVIP

Dissertation for MSc Degree of Shanghai Jiao Tong University FLOW SHEAR STRESS AND VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELLS PROMOTE ENDOTHELIAL DIFFERENTIATION OF ENDOTHELIAL PROGENITOR CELL VIA ACTIVATION OF Akt MSc Candidate: Ye Cao Supervisor: Proferssor Zhiqiang Yan Department: Biomedical Enggineering School: Life Sciences and Biotechnology Shanghai Jiao Tong University May 2007 流体切应力和血管平滑肌细胞诱导联合培养 内皮祖细胞的分化及p-Akt 的调控作用 摘 要 血管内皮损伤后的修复对于延缓和防止心血管疾病的发生发 展具有重要意义。当血管内膜损伤时，循环血中的内皮祖细胞 （endothelial progenitor cells，EPCs ）迁移到损伤部位时就会与暴 露的血管平滑肌细胞 （vascular smooth muscle cells ，VSMCs ）接触， 受到 VSMCs 和血液动力学的影响，进而分化为内皮细胞 （endothelial cells，ECs ），参与损伤内皮的修复。因此，研究EPCs 的分化行为，应该考虑血流力学因素及VSMCs 的影响。 本文采用密度梯度离心法和差异贴壁法从人脐血中获得 EPCs ，并以 DiL-acLDL 和 UEA-lectin 双色荧光法鉴定。应用 EPCs 与 VSMCs 联合培养的平行平板流动腔系统，对 EPCs 施加 5 dynes/cm2 切应力，观测切应力和 VSMCs 对 EPCs 分化的影响。同 时，流式细胞技术检测了细胞表面标志 CD133、CD34、CD31 和 vWF 的表达率变化。免疫印迹法定量检测Akt 蛋白的表达量变化， 并且用 Akti 抑制 Akt 磷酸化表达，结合流式细胞技术检测 Akti 预 处理后上述各种细胞表面标志的表达率。细胞粘附实验检测 EPCs 的粘附并以克隆形成单位计数评价EPCs 的增殖。 结果发现：① VSMCs 使 EPCs 形态略微伸长并上调了 ECs 表 面标志CD31 和vWF 的表达率，同时下调了祖细胞表面标志CD133 和 CD34 的表达率；② 切应力使 EPCs 形态显著伸长并提高了 CD31 和 vWF 的表达率，同时显著降低了 CD133 和 CD34 的表达 率；在联合培养加力的条件下，切应力对上述各种表面标志表达率 的影响更为明显，其中 CD31 与联合静止组相比上调了330 %，vWF 上调了 29 % ；③ 各组 p-Akt 的表达率变化与ECs 表面标志 CD31 和 vWF 的表达率变化趋势相同，与联合培养加力组相比，添加 Akti 的联合加力组的 CD31 和 vWF 的表达率明显下降，而 CD133 和 CD34 的表达率则显著升高；④ 与 VSMCs 联合培养组 EPCs 的粘 附比单独培养时上升了63 % ；而克隆形成单位数量下降了约 60 % 。 上述结果表明，VSMCs 和流体切应力分别能够促进 EPCs 向 ECs 分化，两者协同作用的效果更为显著；同时，在联合培养条件 下，Akt 的活化参与了流体切应力对 EPCs 分化的影响。VSMCs 促进联合培养的 EPCs 粘附，抑制其增殖。 关键词：流体切应力，血管内皮祖细胞，血管平滑肌细胞，联合培 养，分化，Akt FLOW SHEAR STRESS AND VASCULAR