绿僵菌侵染蝗虫异糖蛋白及其酪氨酸蛋白磷酸酶在寄主血淋巴中的靶标蛋白分析.pdfVIP

Ph.D Dissertation of Chongqing University Analysis of the Differentially-Expressed Glycoproteins in Locusta migratoria Haemolymph Mycosed with Metarhizium anisopliae and the Phosphoproteins in the Haemolymph Targetted by the Fungal 2 Protein Tyrosine Phosphatase Ph.D Candidate: Wang Chutao Supervisor: Prof. Xia Yuxian Major: Biomedical Engineering College of Bioengineering Chongqing University October 2007 2 This research was funded by the following projects: Key project from ministry of Chinese education: Research on the phosphoproteins targetted by the phosphotase from insect pathogenic fungi. No.03137. New centuary asistant plan for the talent from ministry of Chinese education. NCET-04-85. 摘 要 金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae ）是一类应用广泛的昆虫病原真菌，在 东亚飞蝗防治中起着重要作用。与化学农药相比，真菌杀虫剂尽管安全，无环境 污染，但存在着杀虫速率慢的缺点，这在很大程度上阻碍了绿僵菌杀蝗剂的应用。 研究病原真菌侵染过程中，昆虫与病原真菌相互作用，探索昆虫的防御机制和病 原真菌的致病机理可为发展新型高效真菌杀虫剂提供依据。 病原真菌侵入昆虫血腔后到寄主死亡前，是决定病原真菌是否能杀死寄主的 关键时期，病原真菌与寄主两者间发生着非常复杂的相互作用。一方面，病原真 菌通过释放破坏素以降低寄主的细胞防御反应，分泌葡萄糖苷酶、海藻糖酶和酸 性磷酸酶等水解酶类以分解利用寄主体内的营养物质，从而耗竭寄主体内营养； 另一方面，寄主也会通过细胞和体液免疫反应积极抵御病原真菌的侵染。 糖蛋白和磷酸化蛋白是广泛分布在生物体内的两种主要的翻译后修饰蛋白。 这两种蛋白都在生物体的多种生命活动过程中起着重要的作用。近年来，针对糖 蛋白和磷酸化蛋白的研究，特别是一些与疾病和免疫有关的糖蛋白研究已成热点， 为认识一些疾病的分子机理奠定了理论基础，并为通过基因工程手段治疗这些疾 病提供了作用靶标。 本研究以东亚飞蝗和金龟子绿僵菌（M. anisopliae ）菌株CQMa102为研究材 料，首次用高通量、高分辨率的双向电泳技术在感病昆虫血淋巴中筛选出了13个 差异表达糖蛋白点。通过对差异糖蛋白肽质量指纹图谱和肽段de novo测序分析， 鉴定出了其中的3个蛋白。同时利用双向电泳技术和串联质谱技术，在东亚飞蝗血 淋巴磷酸化蛋白中找到了2个绿僵菌PTPase靶标磷酸化蛋白。通过关于这3个糖蛋 白和2个磷酸化蛋白的研究报道，分析推测了它们的可能生理功能和在昆虫与寄主 相互作用过程中的可能作用。为了解病原真菌的致病机理和昆虫的防御机制提供 了理论依据，也为进一步研究这些蛋白在绿僵菌侵染东亚飞蝗过程中的确切作用 奠定了基础。主要研究结果如下： ①东亚飞蝗健康雄成虫在羽化后 5d 到 13d 这段时间，血淋