茶组植物的分子统学研究——遗传多样性与分类.pdfVIP

摘要 Camellia Lirul、山茶科Theaceae。 茶组Sect．Thea(L．)Dyer属于山茶属Genus 除茶『c 它是山茶属中最有价值的一个组，而茶又是茶组中最重要的一种。作者对茶树基 因组DNA提取方法、茶树(re内)资源遗传多样性、茶树资源的分子标记鉴别、茶 组分子系统学和形念系统学等进行了较系统深入的研究．傲得以下重要结果。 1、在前人研究基础上，建立了茶树基因组DNA的SDS．异丙醇提取法。该法 提取缓冲液使细胞维持一定的渗透压，研磨时使细胞核基本保持完整；在细胞核 被裂解之前去除细胞质中的茶多酚、大部分蛋白质和RNA；而后用SDS裂解细胞 核，异丙醇或乙醇沉淀DNA，这样能经济、快速和有效地从富含茶多酚、茶多糖 u 等次生物质的茶树新梢中提取基因组DNA。基因组DNA平均得率为527 g／g鲜 重，经鉴定适合进行限制性酶切和RAPD扩增。基因组DNA质量以新梢最好，干 梢次之；液氮(．196C)冷冻保存好于．20。C保存。应用硅胶脱水干燥成功保存茶树新 梢，对解决野外远距离采样具有实践意义。 2、从100个随机引物中筛选出20个用于对我国15份茶树(种内)资源遗传多 的137条谱带中，8条是共有的(占5．8％)，多态性程度达94．2％，资源间的遗传距 离在O．16．0．62之问，平均为0．37，遗传多态性和遗传距离远比肯尼亚、韩国、日 本等大，从DNA分子水平上更加证实了中国是茶树的原产地和起源中心。引物的 多态性频度在O．07至O．93之间，总平均为O．47，属于比较高的多态性频度，其中引 结果显示，可划分为3个类群，同时探讨了类群内和类群间的亲缘关系。 3、对原产于云南等地的24份茶树资源进行分子标记鉴别研究，表明RAPD 标记在鉴别茶树资源方面非常有效。有3种独立的方法：1)特殊的标记；2)特异的 谱带类型；3)不同引物提供谱带类型的组合，可用于茶树资源的分子标记鉴别。 OPO．13等12个引物共存在15个和缺失3个特异标记，可以鉴别其中14份资源； 引物OPO．13扩增的14种谱带类型可以鉴别10份资源：2—3个引物谱带类型的组 合分别可以鉴别15、17和20份资源。利用最少数量引物获得最大鉴别能力，对 型的组合可以鉴别所有24份资源，包括形态和生化成分上几乎没有差异的2株毗 邻大茶树。 均6．8条／引物)是多态的，多态性程度是95．3％。引物多态性频度在O．04—0．96之间， 分为“五室类群”和“三室类群”两大类。在UPGMA分子系统树上，两大类下 可分别再分3个和2个亚类群，这和茶组植物的细胞学、化学和数学分类法基本 一致。同时从遗传距离上探讨了一些种的亲缘关系和分子进化。 综上所述，RAPD标记不仅适合于茶树种内水平，也同样适合于组内种间水平， 为茶树及其近缘植物遗传多样性、亲缘关系和分类鉴别提供了新颖可靠的分子学 方法和证据。 5、通过对野生大茶树居群、其它茶树资源等的系统研究以及茶组分子系统学 分析，结合前人的茶组分类研究，把张宏达分类系统的42种4变种茶组植物进行 归并，对其形态学分类系统进行了修订。该系统以张氏系统“系”的划分为基础， 以子房室数、花柱分裂数和子房茸毛为主要依据，结合中轴大小、果皮厚度、花 冠大小、花萼茸毛及树型、枝叶等的形态特征，将它们归并为大厂茶Camellia E taliensis(w．、M tachangensis C．Zhang、大理茶c crassicolumna Chang、秃房茶Cgymnogyna Chang和茶C sinensis sinensis 5种，在茶下分普洱茶C