荔枝坐果与多胺关系及相关基因克隆研究.pdfVIP

摘要 中的作用的研究日益引起人们的重视。本研究紧密围绕荔枝正常坐果与内源多胺的 关系，分析坐果过程中内源多胺的变化、外源多胺处理对荔枝果实发育启动和正常 坐果过程的影响，并克隆荔枝组织中多胺合成途径的关键酶孓腺苷甲硫氨酸脱羧酶 枝果实发育过程中此类酶基因的功能分析和表达分析，在理论上，可能阐明荔枝果 实发育中SAM代谢流向与多胺和乙烯生物合成及其在荔枝正常坐果和生理落果过 程中作用的分子机理，丰富荔枝果实发育的理论；在实践上，可能为栽培技术创新 提供理论依据，从外源多胺应用技术和内源多胺代谢调控的角度，为荔枝高效低耗 和优质果品生产提供新的途径。本研究获得如下主要结果： 1．套袋不授粉加人工处理外源多胺的诱导荔枝单性结实的试验表明，桂味和糯 米糍不可诱导单性结实，妃子笑可以用外源多胺人工诱导单性结实，三种多胺的诱 谢花后外源多胺处理表明，三种外源多胺均可明显提高妃子笑荔枝的坐果率，尤其 以Put处理效果最显著。 2．建立起适合荔枝材料中Put、Spd、Spm三种内源多胺含量分析的高效液相色 谱测定方法，一次样品的测定可在15 nmol 准偏差均小于5％，说明测定方法稳定、分析精密度高。 3．分析测定三个荔枝主栽品种在花穗发育与坐果初期其叶片与花器官和幼果中 内源多胺含量的变化：在叶片中，正常成花的妃子笑三种多胺含量先升后降，在盛 花期出现高峰；柱昧未成花的叶片三种多胺的持续下降则与其此期新梢大量发生密 切相关。在花器官和幼果中，三个荔枝品种多胺总量要明显高于叶片中；妃子笑三 种多胺含量以Spd含量最高，且Spd含量在坐果初期均保持较高水平。 4．在果实膨大期，分析外源多胺处理对内源多胺含量的影响：外施高浓度的 Spd使内源Spd的含量明显下降；外施Spm则可以大大提高内源Spd的含量；外施 Put只能提高内源Put的含量，对Spd和Spm含量影响不大；三种多胺的混合使用 对提高内源Put的效果显著，可以缓和Spd和Spm的变化幅度。在这三种多胺中， Spm与Spd相互影响，作用显著。 5．采用同源序列扩增法，首次从荔枝中克隆分离得到一段728bp的DNA序列， 酸残基，Blast结果显示，该基因片段推导的氨基酸序列与其他9种植物ACS基因编 码的氨基酸序列同源性在82％．89％之间。并且有4个保守结构域，在保守区1与保 守区3分别插入了一段109bp与125bp的内含子。 III SAMDC基因片段， 6．采用RT—PCR的方法，首次从荔枝中克隆分离到584bp 显示，该基因片段与已报道其他植物的SAMDC基因的核苷酸序列同源性在78％以 上，其推导的氨基酸序列与其他9种植物SAMDC基因编码的氨基酸序列同源性在 75％．85％之间，并且有4个较长的保守结构域。 chinensis 关键词：荔枝(LitchiSonn．)；多胺；SAMDC基因；ACS基因；高效液相色谱分析 IV Abstract activematerialswithbroadfunctionsof Polyamines，asphysiological regulation，play of trees．Inthe rolein andfruit fruit acritical flowering setting presentpaper，the betweenfruit and wasstudied．Theof relationship settingendogenouspolyamine changes in