草莓高效再生体的建立和抗除草剂Bar基因工程菌的构建.pdfVIP

中文摘要 ananassa 本试验以适合安徽省栽培的草莓(FragariaOuch)优良品种———丰香、鬼 怒甘和章姬为试材，通过对茎尖增殖、叶片愈伤组织诱导、生根培养、移栽基质的筛 选研究，建立起草莓简单、快速、高效的茎尖离体再生体系，为草莓转基因研究提供 进行三亲杂交，为bar基因转化提供工程菌。另外，对草莓bar基因转化农杆菌侵染 体系作了初步探索。 试验研究获得的主要结果如下： ． 1、草莓茎尖消毒不同处理的效果存在显著差异。其中，处理Ⅳ效果最好，成活 率达到90％，与其他处理的差异达到了极显著水平。 nlnl、0．5～0．7 时成活率不到20％；外植体大小为0．3～O．5 mill时，成活率分别达到 了80％、84％。 3、丰香、鬼怒甘及章姬的最佳增殖培养基分别为：MS+BA0．5 mg／L+NAA0．10 1．0 mg／L、MS+BAmg／L+NAA0．10mg／t,、MS+BA0．5mg／L+NAA0．20mg／La说明不 同基因型的品种最佳增殖培养基存在差异。 4、应用SPSS软件分析，得出诱导叶片愈伤组织的最佳培养基是：MS+BA3．0 O．2 0．3 rag／L+2．4—D mg／L+IBAmg／La 0．1 5、丰香、鬼怒甘、章姬生根的最适培养基分别为是：1／2MS+IBA mg／L、 0．0 0．2 1／2MS+IBA mg／L、1／2MS+IBArag／L。 6、分步炼苗后移栽，发酵过的稻壳+菜园土(1：1)，成活率达到98％左右；其 它配方成活率也到达了90％左右。 菌落PCR、质粒PCR、质粒双酶切电泳检测，证明工程菌构建成功。 8、试验筛选出浓度为25 mg／L和20mg／L的卡那霉素分别是草莓试管苗、叶片 愈伤组织分化阶段的适宜选择压。 9、对工程菌抑制抗生素浓度筛选，Cef与Carb有效抑菌浓度均为200 mg／L。 Abstract 1nhe ananassa strawberry(FragariaDuch)cultivars including and in as suitableforcultivationAnhuiProvinceweretakenmaterialto shiyome establiSha and induction simplehighfficientregenerationsystem．Stemapexmultiplication,callus from cultureandmediumfor had beenstudiedto a leaf,rooting