荞麦中D-手性醇分离提取与纯化研究.pdfVIP

荞麦中D．手性肌醇的分离提取与纯化研究 摘 要 esculentum 荞麦(FagopyrumMoench)是一种适于在冷凉气候下生长的短季蓼科 tataricum Gaert)和甜养 (polygonacoae)作物。植物分类学主要有苦荞(Fagopyrum eseulentum (FagopyrumMoench)两个品种。荞麦富含高生物价的蛋白质、维生素、矿 物质元素、黄酮类化合物等，具有多种生物功能，如降血糖、降血脂、抗癌、抗氧化及 清除自由基等。研究发现，养麦种子中含有少量D．手性肌醇单体及大量的D．手性肌醇 病人)症状。 促敏剂，能有效地促进胰岛素功能，降低血糖、血甘油三酯水平等。进一步研究发现： D．手性肌醇在唯一的降血糖激素．胰岛素的信号传导过程中发挥极为重要的作用，当体 内缺乏足够的D．手性肌醇时，会导致胰岛素抵抗现象。因此，补充n手性肌醇可提高机 体组织对胰岛素的敏感性，消除胰岛素抵抗，从根本上调节机体的生理机能和代谢平衡， 从而降低糖尿病的发生率。 本研究首先采用三种不同的提取方法对荞麦中D．手性肌醇粗提工艺进行研究，包括 不同溶剂提取法、微波法、超声波法。通过对不同提取方法的工艺条件进行研究，分别 确定出最佳的工艺条件。实验结果表明，采用不同溶剂提取养麦中D．手性肌醇时，乙醇 作为溶剂提取效果最好，乙醇提取的最佳工艺条件：温度30(2，乙醇浓度50％，料液比 取荞麦中D．手性肌醇，经单因素及正交试验确定最佳工艺条件：微波功率245W，微波 加热时间120s，乙醇浓度80％，料液比1：30，此时D．手性肌醇的含量达到5．1Img／g；采 用超声波法时，确定最佳工艺条件：乙醇浓度50％，料液比l：15，提取时间30mill，浸 提温度50C，此时D．手性觐醇的含量为5．19mg／g。通过比较三种不同的提取方法对Ⅸ手 性肌醇提取效果影响，确定采用超声波法提取时，荞麦中D．手性肌醇提取效果最好。 在荞麦中D．手性肌醇粗提工艺基础上，为进一步提高养麦提取物中D．手性肌醇的 含量，去除提取物中可溶性碳水化合物及其它杂质。本研究采用两种不同方法作用于荞 麦提取物进行研究。方法一采用不同种类微生物发酵养麦提取物，增加荞麦籽粒水溶液 中D．手性肌醇及其衍生物的含量，同时减少提取物中总糖含量，本研究采用酿酒酵母、 毛霉、大肠杆菌、蜜蜂生球拟酵母、米曲霉、枯草芽孢杆菌、解酯假丝酵母、黑曲霉接 种于养麦提取物中进行培养，并跟踪测定提取物中各种成分的含量变化。结果表明，采 用米曲霉培养5天后，养麦提取液中D．手性肌醇含量达到6．07mg／g，且总糖含量降低 较大，减少约53％，综合考虑为最符合条件的提取组分。采用活性炭柱层析纯化样品。 D．手性肌醇及糖醇类物质可吸附于活性炭柱，然后进行梯度洗脱，经高效液相色谱法测 定D．手性肌醇的纯度达到31．8％。此方法既简化D．手性肌醇纯化工艺，又可减少纯化 过程中有机溶剂的使用量，降低生产成本。 方法二利用萌芽及酸水解方法提高荞麦中D．手性肌醇含量，荞麦中D一手性肌醇大 部分以衍生物的形式存在。荞麦籽粒经萌芽后，D．手性肌醇单体含量明显增加，提高约 8倍。因此，本研究采用萌芽后荞麦籽粒作为后续试验材料。酸水解使养麦中D．手性肌 醇衍生物．荞麦糖醇转化为D．手性肌醇，明显提高养麦中D．手性肌醇的含量。同时大部 分碳水化合物转化为不溶性副产物，有利于简化D．手性肌醇的纯化过程。实验结果表 明，养麦中D．手性肌醇最佳提取工艺为：Hcl浓度为9N，温度为95℃，时间为18h， 料液比为l：10。在此条件下，提取物中弘手性肌酵含量达到62，5mg／g，达到未萌芽、 水解前提取含量的15倍左右。D．手性肌醇提取物纯化过程，用等体积水溶解，加入2 倍体积95％乙醇，70℃搅拌1h，充分反应后，取出冷却至15℃，得到D一手性肌醇沉淀 固体。所得沉淀物，D．手性肌醇纯度较低。可用适量的水溶解，加入乙醇溶液，通过反 复的加热和冷却处理，进行重结晶。经多次的重结晶处理，D．手性肌醇的含量达到 432．92mg／g。 关键词：D-手性肌酵，荞麦，分离纯亿，微生物，酸水解