芹菜胚性细胞悬系的建立及原生质体培养研究.pdfVIP

摘要 芹菜(和fⅢgraveoJensL．)属伞形科，原产地中海沿岸，我国栽培历史悠久，各地均有种植。 建立芹菜的离体培养再生体系和胚性细胞悬浮系为以后的原生质体培养、融合、突变体的筛选和 遗传转化打下基础，本文取得的主要研究结果有以下几方面： l通过对芹菜离体培养过程中激素配比、外植体、基因型及植株再生等条件的研究，建立了 芹菜高频植株再生体系。研究结果认为：芹菜下胚轴最适于诱导愈伤组织，其愈伤组织诱导的最 img／L+KT S 佳培养基是MS+2，4-D lmg／L，继代培养和胚状体诱导的最佳培养基分别为M 0．5m 0．5m lm +2，4一D g／L+KT g／L+4％甘露醇+cH500mg／L和鹇+cH 500mg／L+2，4-Dg／L； 基因型对愈伤组织和胚状体的诱导影响很大；愈伤组织在继代培养基上可以从非胚性状态向半胚 性和胚性状态转化。在无激素的惦或l／2Ms固体培养基上继续培养不定芽，可以生根并获得了芹 菜的完整再生植株。再生植株经驯化后，将其移栽入装有营养土的营养钵中，成活率95％以上。 2将胚性愈伤组织接种于与继代培养基成分相同但不加琼脂的MS液体培养基进行悬浮培 养，经过3．5次继代后可形成增殖迅速、分散度良好的具有较高的体细胞胚分化能力的芹菜胚性 细胞悬浮系。芹菜细胞悬浮系的生长周期为20天左右，队干重为生长指标．得到的细胞增殖曲 线呈“S”形。接种量对悬浮细胞的生长影响较大；最佳接种量为0．8克／40ml悬浮液。悬浮演的 PH值呈现先下降后上升的趋势；MAD含量呈现不对称的“M”形变化，这些变化都与生长曲线 变化趋势相关。不同品种间胚性细胞悬浮系的生长能力不同。悬浮系愈伤组织的分化能力低于其 CH+O．25mg／L 对应的胚性愈伤组织分化能力。悬浮细胞团转入1／2MS+500mg／L KT固体分化培 养基诱导出不定芽，30天后再转入MS基本培养基，获得完整的再生植株。 3利用芹菜胚性细胞悬浮系成功分离得到大量原生质体，其中酶种类和浓度、酶解时间、悬 浮细胞培养时间、渗透压调节剂对分离原生质体的产量和活力有重要影响。获得芹菜大量原生质 体的悬佳反应体系为：所需酶液组成为3．0％纤维素酶Onozuka 渗透压稳定剂，原生质体产量为2．50×1079～，原生质体活力83．41％。原生质体浅层培养，基本 培养基为1／2MS或DU，两天后，重新再生细胞壁并进行第一次分裂，逐步降低渗透压至甘露酵 3％，大约30天形成小愈伤组织。在I／2MS+ImIg／L 2，4-I)+0．5mg／LKT+Il蚶露醇+500mg／L水解蹈 CH+O．25 蛋白经增殖培养后在I／2MS+500mg／Lmg／LKT固体分化培养基诱导出不定芽．30天后再 转入5lS基本培养基，获得完整的再生植株。 4褐化问题存在于芹菜离体培养的各个阶段，通过对外植体类型及其大小、基本培养基及培 养方法、吸附剂和抗氧化剂对控制褐化的影响研究，认为：O．5．0．8cm下胚轴在初代愈伤组织诱导 中不易褐化，MS基本培养基附加3％蔗糖比lf2MS培养基在控制褐化方面好的多，另外，0．59／L的 PVP和100mg／L的DTT也可以对褐化起到一定的作用。同时，研究认为光照培养容易引起褐化， 特别在胚性细胞的继代培养阶段。 关键词：芹菜，离体再生植株，悬浮培养，原生质体 Abstract cultural ofanefficient historyinChina．妞establishments Celery(ApiumgraveolensL)haslong