荔枝体细胞胚胎生及种质超低温保存研究.pdfVIP

荔枝体细胞胚胎发生及种质超低温保存研究 摘 要 chinesis 荔枝(Litchi sonn)，是我国南方著名的一种亚热带果树。由于离体培养比较困难，使得荔枝 体胚发生和种质离体保存研究进展缓慢。作者于2001年7月一2003年3月以荔 枝为试验材料，对体胚发生和种质超低温保存进行了深入研究，旨在探索影响其 体胚发生和种质超低温保存的因素，建立起较完善的体胚发生体系和胚性悬浮细 胞的玻璃化法冻存体系，以期荔枝为生物技术应用和种质超低温保存提供理论基 础和技术支持。 主要研究结果如下： 1从外植体的选择，愈伤组织的诱导，胚性愈伤组织的建立，体胚诱导，体 胚生长发育以及植株再生等方面对荔枝花药体胚发生进行了系统研究。结果表明 花药在MS+2，4-D 2mg／L+NhA 0．2mg／L以及含509／L蔗糖的培养基上诱导胚性愈 0．5mg／L+NAA 伤组织的效果好，把胚性愈伤组织先后转移到分化培养基MS+KT Img／L+NAA0。5mg／L，水解 0．Img／L，活性炭0．5％；成熟培养基MS+BAlmg／L+KT 酪蛋白500 mg／L，蔗糖509／L上培养2-3个月能再生植株。初步建立了以花药 培养为基础的荔枝体胚发生系统。 2对荔枝胚性愈伤组织保存进行初步研究，结果表明胚性愈伤组织适宜在 MS+2，4-D Img／L+NAA0．2mg／L培养基中进行保存，并通过固体与液体交替培养 方式可以达到长期保存胚性愈伤组织的目的。本研究已对胚性愈伤组织保存一 年，至今仍具有良好的生长势和胚性特征。 3首次采用玻璃化法对荔枝胚性悬浮细胞进行超低温保存。适宜的保存程序 一1．2mol／L的蔗糖+MS基本培养基洗涤一TTc检测和恢复生长。TTC检测保存细 胞的相对存活率高达27．1％。 4应用透射电镜观察了胚性悬浮细胞在预培养、脱水、冷冻等玻璃化法冷 冻的全过程中细胞超微结构的变化，研究发现有部分细胞结构完整；但也有部分 细胞在处理过程中，质膜、核膜发生致死伤害。 关键词：荔枝；体胚发生；玻璃化法；超低温保存；超微结构 onSomatic and Studies Germplasm Embryogenesis ofLitchi Cryopreservation Abstract a chinesis to andis Litchi(Litchf subtropical Soma)belongsSapindaceaefamily vitro therearedifficultiesinlitchi fruitknownforitsdeficiousflavors．As culture， fewstudies on$omatic and only reported embryogenesisgermplasmcryopreservation． of