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第五章 细胞融合 细胞工程多媒体教案 主讲人：王文星 东北大学理学院 主要内容 5.1 细胞融合的定义 5.2 细胞融合的意义 5.3 细胞融合的建立和发展 5.4 细胞融合的基本原理 5.5 融合材料的制备 5.6 细胞融合的方法 5.7 融合细胞的选择 5.8 细胞融合的应用与举例 5.9 小结 5.10 思考题 不同细胞融合方法比较 细胞融合的影响因素 植 物 细 胞 融 合 PEG诱导融合时的作用时间 PEG规格和纯度 电场融合时，融合率与原生质体密度 加入CaCl2 对原生质体进行预处理 动 物 细 胞 融 合 亲本细胞表面性质的影响 细胞种类 温度和运动状态 氧气条件 Ca2+条件 pH影响 思考题 1. 细胞融合有怎样的意义？ 2. 细胞融合的主要方法有哪些？特点分 别是怎样的？ 3. 怎样选择融合后的杂合细胞？ 4.简述利用杂交瘤技术进行单克隆抗体大规模生产的技术步骤与要点。 (2) 抗性互补筛选法：利用亲本细胞原生质体对抗生素、除草剂及其它有毒物质抗性差异选择杂种细胞。 如：亲本1：对放线菌素D抗性，但在MS培养基上不能超过50个世代 亲本2：对放线菌素D很敏感，但能在MS上生长 杂种细胞能在含有放线菌素的MS培养基上生长，而亲本和其它细胞死亡。 （3）利用物理特性筛选法：根据亲本的原生质体大小、颜色、漂浮密度及电泳迁移率、形成的愈伤组织的差异筛选杂种细胞。 亲本1：用异硫氰酸荧光素染色原生质体 亲本2：叶肉细胞原生质体 在荧光显微镜下，亲本1为红色，亲本2为绿色，杂种细胞可以区分。 （4）利用生长特性筛选法：利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞。 例如，粉兰烟草与朗氏烟草细胞原生质体均需外源激素才能生长，但其融合细胞可以产生内源激素，在培养基上不需加激素。 动物细胞的筛选方式： 1）利用抗药性筛选系统：利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞。 亲本A：对氨苄青霉素敏感，对卡娜霉素不敏感 亲本B：对卡娜霉素敏感，对氨苄青霉素不敏感 杂种细胞可以在含有两种抗生素的培养基上生长 2）营养互补筛选系统：细胞在缺乏一种或几种营养成分时，不能生长繁殖，即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营养互补作用原理可以筛选杂种细胞。 亲本A：色氨酸缺陷型 亲本B：苏氨酸缺陷型 杂种细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培养基上培养，而亲本细胞均会死亡。 3）温度敏感突变型杂种细胞的筛选：一般的培养细胞能在32度到40度的范围内生长，但温度敏感突变型的细胞能在高温或低温下生长。由此筛选杂种细胞。 亲本一：具有卡那霉素抗性但只能在37度左右生长。 亲本二：高温敏感突变型，但不能抗卡娜霉素。 杂种细胞能在高温和含卡娜霉素的培养基上生长。 5.8 细胞融合的应用与举例 动物细胞融合是从细胞水平来改变动物细胞的遗传性，用于生产单克隆抗体、疫苗等特定的生物制品，改良培育动物新品种，缩短动物的育种过程。动物细胞融合的应用范围已广及生物学的各个分支学科，特别是在绘制人类基因图谱方面取得了显著成绩。虽然细胞杂交属于理论生物学范畴，但在实际应用方面也有重大突破。在基础理论研究上，动物细胞融合技术对研究细胞分化、基因定位、肿瘤发生机制等方面都有重要意义。在实际应用方面，动物细胞融合技术在药物定向释放系统、细胞治疗以及抗肿瘤免疫等方面起到重要的作用。 动物细胞融合技术： 5.8 细胞融合的应用与举例 植物细胞融合技术目前主要是作为扩大变异的手段，同时也正朝着将抗药性和胞质雄性不育等细胞质基因导入另一个体细胞的方向发展，有可能形成新的核质杂种。 在生产应用研究方面，植物细胞融合在育种上有重要的应用价值，通过诱导不同种间、属间甚至不同科间原生质体的融合，可能打破有性杂交不亲和性的界限，广泛地组合各种基因型，从而有可能形成有性杂交方法所无法获得的新型杂种植株；另一方面又可将各种细胞器、DNA、质粒、病毒、细菌等外源遗传物质引入原生质体，从而有可能引起细胞遗传性的改变，为某些珍稀植物的快速繁殖、植物的复壮等提供了可行的方法，应用于植物育种、种质保存、无性系的快速繁殖和有用物质生产等。 植物细胞融合技术： 5.8 细胞融合的应用与举例 应用举例： 1. 单克隆抗体的生产 2.利用原生质体融合和培养技术培育新品种植物 1. 单克隆抗体的生产 1975年Kohler和Milstein在细胞融合的基础上，首先建立了B淋巴细胞 杂交瘤技术以制备单克隆抗体。目前，各种抗原的单克隆抗体已被广泛应用于免疫学、生物化学、药物学、细胞生物学等生命科学的各个领域，尤其是各种癌症的诊断和治疗，以由此发展成为一门高技术产业。 创始人：米尔斯坦 T淋巴细胞（又名T细胞）和B淋巴细胞（又名B细胞）都起源于造血