《转基因工程菌的研究及其在农业中的应用》.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６ｓ）：２９５～３００ 转基因工程菌的研究及其在农业中的应用 １，３ ２，３ １ ３ 赵　莹 　孙　哲 　娄玉杰 　张宏福 （１吉林农业大学动物科技学院　长春　１３０１１８　２东北师范大学草地科学研究所　长春　１３００２４） （３中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室　北京　１０００９４） 摘要　转基因工程菌的构建是基因工程技术中的一个前言课题，它具有良好的产业化前景。其 构建包括最佳表达载体的构建，适宜宿主细胞的选择、转化、筛选鉴定和遗传稳定性鉴定，获得质 粒能稳定遗传的、高效表达的转基因工程菌等过程。就转基因工程菌及其所用的载体的构建，大 肠杆菌、乳酸杆菌、酵母菌和蓝藻菌等受体菌的选育，外源基因的高效表达及其在农业中的饲料 用植酸酶基因工程菌，杀虫微生物农药和根瘤菌基因工程菌应用方面进行了概述，并指出了一些 转基因工程菌应用的安全性及不够完善的地方。 关键词　转基因工程菌　构建　受体菌　应用 中图分类号　Ｑ７８９ 　　１９７３年Ｓ．Ｃｏｈｅｎ等将两种分别编码卡那霉素和四 １　转基因工程菌的构建 环霉素的抗性基因相连，构建出重组的ＤＮＡ分子，然 后转化大肠杆菌获得了既抗卡那霉素又抗四环霉素的 　　构建转基因工程菌是基因工程技术中的前沿课 转化子菌落，这是第一次成功的基因克隆实验，标志着 题。其构建包括最佳表达载体的构建，适宜宿主细胞 ［１］ 基因工程的诞生 。基因工程，又称转基因工程或重 的选择、转化、筛选鉴定和遗传稳定性，获得质粒能稳 组ＤＮＡ技术，就是人类按照自身的需要和意愿，用类 定遗传的、高效表达的转基因工程菌等过程。 似工程设计的方式，人为地、有目的地、有计划地通过 １．１　表达载体构建过程 基因克隆、转移及表达等方式形成人们所需要的新生 　　表达载体的构建过程基本与基因克隆过程相似， ［２］ 物种或类型 。基因工程技术将成为２１世纪农业生 都包括目标基因的扩增、电泳回收、酶切、连接等步骤， 物技术的核心。可以预见基因工程必将给人类生活带 目前已有很多具有多克隆位点的表达载体商业化。构 来巨大的变革。 建的关键点是把外源目标基因正确克隆到多克隆位 　　随着基因工程技术的发展，到２０世纪中后期人们 点，形成完整的开放阅读框架。有些还涉及对基本载 利用基因工程的方法对微生物进行了改造，我们称这 体进行必要的改造，如更换筛选标记与启动子和增强 类微生物为基因工程菌，也叫做转基因工程菌。由于 子等等，使之更适于表达外源目的基因，这已经成为载 微生物具有转化效率高、繁殖快、容易培养、易于控制 体构建的一个重点。 的特点，因此转基因工程菌得到了广泛的应用，其研究 １．１．１　ＰＣＲ定位克隆目标基因　目标基因是编码蛋 前景亦十分广阔。因此，本文就转基因工程菌的研究 白质或多肽的ＤＮＡ序列，一般情况下是功能结构基 及其在农业中的饲料用植酸酶基因工程菌，杀虫微生 因。目标基因的正确克隆在整个构建中是至关重要 物农药和根瘤菌基因工程菌应用方面进行了概述。 的，只要一个碱基发生变化，就可能导致编码氨基酸的 变化，从而影响产物蛋白的功能和生物活性。随着 收稿日期：２００８０１２１　　修回日期：２００８０４０２ ＰＣＲ仪性能的改进和自动化程度的提高，ＰＣＲ技术已 国家自然基金资助项目３０５７１３４９）、中国博士后科学 成为实验室的常规操