利用多重聚合酶链反应和多色毛细管电泳分析布氏菌多位点可变数目串联重复序列.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 2O15，31 (4) ChineseJournalofZoonoses 303 DOI：10．3969／cjz．j．issn．1002—2694．2015．04．003 利用多重聚合酶链反应和多色毛细管电泳分析 布氏菌多位点可变数 目串联重复序列 姜 海 ，荣 蓉。，田国忠 ，赵 娜 ，赵鸿雁 ，朴东 日 ，赵赤鸿 ，崔步云 摘 要 ：目的 传统的布鲁 氏菌多点可变数 目串联重复序列分析方法涉及 16个位点(MLVA一16)，包括单重聚合酶链反 应和琼脂糖凝胶 电泳，一直 以来都作为标准的基因分型方法 ，用于布病 的病原监测和流行病学调查 。然而，目前这种传统方 法工作量较大，实验室间结果不宜 比较 ；尤其是对大规模菌株进行基 因分型或面临突发疫情时，急需一种高通量且快速 的方 法。方法 用多重 PCR和多色毛细管电泳方法建立一种可靠 的，高通量的且 自动化程度较高的MLVA-16改良分型系统，用 82株菌进行测试 。结果 这种改 良的MLVA一16分型系统具有很高的准确性，且具有快速和高通量 的特点。结论 改良的 MLVA一16分型系统可用于基层布病实验室，为布病 的病原监测提供高效的工具 。 关键词 ：多重 PCR；多色毛细管 电泳 ；布鲁氏菌；基 因分型 中图分类号：R378．5 文献标识码 ：A 文章编号：1002—2694(2015)04—0303—08 M LVA一16locipanelonBrucellaspp．using multiplexPCR andmulticolorcapillaryelectr0phOresis JIANG Hai，RONG Rong ，TIAN Guo—zhong ，ZHAO Na，ZHAO Hong—yan ， PIAO Dong—ri，ZHAO Chi—hong。，CUIBu—yun (1．StateKeyLaboratoryfor fectiousDiseasePreventionandControl，CollaborativeInnovationCenter forDiagnosisandTreatmentofInfectiousDisease，NationalInstituteforCommunicableDiseaseControl andPrevention，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Beijing102206，China； 2．ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Beijing102206，China) Abstract：TheM ultiLocusVariableNumberTandem RepeatAnalysis 16 locipanel(MLVA-16)，involving singleplex PCRsandagarosegelelectrophoresis，isthestandardgenotypingmethodforBrucellaspp．usedalsofortheBrucella interna— tionalonlinedatabase．Tofindarapidandthrough—putgenotypingmethod，modifiedMLVA一16canbeused．W edescribedan alternative，reliable，high-throughputMLVA-16protocolusingmultiplexPCRsandmulticolorcapillaryelectr0ph0resis．Fur— thermore，82Brucellastrainsweretested．ResultsshowedthatthemodifiedMLVA一16hasprovedtObeaccurate，rapidand throughput．Itsindicatedthatthemodif