年轻与老年小鼠血管内皮 细胞microRNA的差异表达.pptVIP

年轻与老年小鼠血管内皮 细胞microRNA的差异表达 中山大学附属第一医院血管外科 张俊斌 朱小南 崔进 陈鹏 王深明 王劲松 血管内皮细胞（EC）对于维持血管正常功能生理稳态及病理性疾病进展起关键作用，随着年龄增长，EC也发生变化 如：eNOS 在EC内随年龄增长而表达降低，在动脉粥样硬化和血栓形成等心血管疾病发生中起重要作用。 研究目的 衰老引起的血管内皮细胞依赖性血管疾病的调节机制至今仍不清楚,本研究探索EC随年龄增长miRNA的变化情况。 方法 年轻（8～12周）和老年（15～20个月）C57BL/6J雌、雄性C57Bl小鼠内皮细胞的分离与培养 MTT法检测细胞增殖速度 Microarray芯片检测技术 .荧光定量PCR（qRT-PCR）验证芯片结果 Western Blot检测EC中eNOS蛋白表达： 统计学处理 结果 图A 图B 图C 图D 分离培养的年轻和老年EC细胞及Ⅷ因子染色。 A.倒置显微镜观察年轻EC（х40）;B.倒置显微镜观察老年EC（х40）; C.年轻EC的Ⅷ因子染色 （х100）;D.老年EC的Ⅷ因子染色（х100） MTT法比较在不同血清浓度下，老年EC增殖速度优于年轻EC（P＜0.05) 生长曲线 不同血清浓度下年轻与老年EC增殖速度比较 Microarray芯片检测结果 qRT-PCR 年轻与老年EC中表达差异的miRNA Western Blot 年轻和老年EC内eNOS的蛋白表达 讨论 老年细胞模型 文献报道中对EC的衰老研究，往往采用脐静脉EC多次传代为模型[1]，然而，动脉EC才应是动脉血管疾病研究的靶目标，本研究采用原代培养的小鼠动脉EC，经免疫组化确认，用于研究动脉EC衰老的变化更合理。 老年EC在体外与比年轻EC更耐受低血清浓度生长，机理不清楚，但我们推测可能与老年EC为适应年龄变化做出的代偿反应有关。 Vazquez等[4]比较老年和年轻小鼠血管平滑肌细胞，也有类似发现，体外老年小鼠血管平滑肌细胞比年轻小鼠平滑肌细胞生长速度快，是血管损伤后老年比年轻血管更易内膜增生的原因之一。 在EC内已发现的与血管生成，如：miR-130a、miR-17-92 cluster、Let-7f 和 miR-27b、miR-378、miR-210 ，或抗血管生成，如：miR-222、MiR-15、miR-16、miR-20a、miR-20b ，或内膜增生相关的miRNA，如：MiR-155、miR-21、miR-126 并未随年龄增长而发生变化。 在我们发现的老年与年轻EC之间差异表达的miR-335-3p，利用在线软件TargetScan , 预测miR-335-3p可能的靶基因，发现eNOS是miR-335-3p可能调控的候选靶基因。 Western 印迹证实,老年EC的eNOS蛋白表达低于年轻EC内的表达，与文献报道一致，但miR-335-3p是否直接调节eNOS表达，需进一步通过双荧光素酶报告基因方法,检测miR-335-3p是否与eNOS的3’-UTR结合验证。 本研究对年轻和老年小鼠的动脉EC进行了miRNA差异分析，得出了初步结果，miR-335-3p在老年EC的高表达在年轻EC的高表达可能与eNOS蛋白在老年EC内表达下降有关，与年龄引起的血管内皮细胞依赖性血管疾病的调节机制相关。 总结 谢谢 * *