重组大肠杆菌高密度培养的进展.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 Pharmaceutical Biotechnology 　2000 ,7 (4) :243～247 243 文章编号 (2000) 重组大肠杆菌高密度培养的进展① 沈毅　 　姚见儿 　易进华 　苏 　勇 (摩尔根谈国际生命科学研究中心 ,上海 201203) 　　摘　要　重组大肠杆菌高密度培养是增加重组蛋白产率的最有效方法。选择最佳的表达系统以及培养基和培养方式是获 得高密度和高表达的重组大肠杆菌的有效途径。在培养过程中 ,通过控制副产物、p H 、温度和诱导时机以及补料方式等参数则 能有效地限定比生长速率 ,从而有利于获得最高的密度和最好的表达。文章从这几方面对近期的研究成果和未来的发展趋势 进行了综述。 关键词 　重组大肠杆菌 ; 高密度培养 ; 分批补料培养 ; 比生长速率 中图分类号:Q782 　　文献标识码 :A 　　大肠杆菌是应用最广泛的基因工程合成异源蛋白的 质粒的稳定性都能显著地增加目的蛋白的产量。升高温 原核表达系统。近几十年来的研究已使大肠杆菌成为现 度可使质粒拷贝数增加 ,如 pM G411 质粒 ,30 ℃时每个细 代分子生物学研究中最常用的材料之一 ,其主要特点有 : 胞 4 个拷贝数 ,42 ℃时增加到每个细胞 140 个拷贝数。此 容易培养、遗传学资料丰富、可用于基因工程的载体较为 外 ,控制培养条件和降低生长速度 ,也可提高质粒的拷贝 丰富。 数。 重组大肠杆菌的高密度培养是增加重组蛋白产率的 质粒不稳定的因素有二 :一为细胞生长分裂时丢失。 μ 最有效方法。根据 Riesenberg 的计算 ,大肠杆菌最高菌体 二为质粒 DNA 发生变化。在含 50 g/ ml 氨苄青霉素的琼 ( ) [ 1 ] 密度理论上可达干重 DCW 400 g/ L 。考虑了培养基和 脂平板上一般有超过 20 % 的细胞失去氨苄青霉素抗性。 ( ) ( μ ) 其他因素 ,最高菌体密度仍可达 200 g/ L DCW 。最近报 如使用高浓度氨苄青霉素 400 g/ ml 对不带质粒的细胞 道的最高值为 190 g/ L (DCW) , 同时蛋白的表达量也可达 进行选择 ,增加表达质粒的拷贝数 ,使接种物中少于 1 %的 到 25 %以上。而国内报道的发酵密度则大多低于50 g/ L , 细胞失去抗性 ,发酵时甚至不加氨苄青霉素 ,仍使诱导前 与国外还存在一定差距。在增加菌密度的同时提高蛋白 仅有少于 3 %的细胞失去抗性。 的表达量 ,可使形成的包涵体包裹得更为紧密 ,包涵体内 对重组大肠杆菌来说 ,不仅要获取高的菌体密度 ,还 目的蛋白也较纯,从而有利于简化下游的纯化操作。 要达到高的蛋白表达量 ,该目的只可能通过优化每个表达 重组大肠杆菌高密度培养与表达系统、培养基、培养 系统来实现。在大肠杆菌中常用的诱导系统有 λ噬菌体 方式、发酵条件控制等多种因素有关。 PL 启动子、trplac 杂合启动子和 T7 噬菌体启动子等几种。 λ 受控于温度敏感