企鹅珍珠贝cdmt酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制.pdfVIP

企鹅珍珠贝Cd．MT酶联免疫检测方法的建立及 试剂盒的初步研制 摘要 镉(Cd)为慢性蓄积性毒物，对。肾脏、肺、肝、神经系统以及血液系统均可 产生毒性，并且具有致癌、致畸和致突变的作用。由于人类的各种活动，特别是近 代工业的发展，使生存环境受到了广泛的Cd污染，工业“三废”中排放的Cd对人 和动物的危害也日益受到重视。 富含半胱氨酸(Cys)、并能被金属诱导合成的金属结合蛋白。MT的一个显著的特点 就是能在转录水平上被环境中的金属所诱导，其表达水平的高低与环境中的金属浓 度有直接的关系。因此，20世纪70年代就有人提出将水生生物体内的MT含量作 为水环境污染的生物标志物。双壳贝类作为底栖生物，它生活在沉积物与水体的界 面，通常认为其生物体内的重金属含量与周围水生环境污染的程度密切相关，能够 真实反映环境的污染状况，因此其体内的MT可作为水生环境重金属污染的指示物。 相应的试剂盒，为贝类Cd．MT的检测提供一种快速、灵敏、简便的检测方法。主 要内容如下： 1．企鹅珍珠贝Cd．MT的诱导、提纯及鉴定：用不同浓度的CdCl2诱导企鹅珍 FastFlow离 G．50凝胶过滤层析和DEAE．Sepharose 的增大而增加；采用sephadex Cd．MT在254nm处的特征峰吸收消失，且吸光度值降低。 2．兔抗企鹅珍珠贝Cd．MT多克隆抗体的制备、提纯与鉴定：将Cd．MT与BSA 偶联，SDS．PAGE显示偶联物的分子量大于70kD；用此偶联物对家兔进行免疫， A50柱 获得效价达1：12800的抗血清；依次用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE—Sephadex 层析对抗体进行分离纯化，获得分子量为35kDa的电泳纯多克隆抗体；该抗体与企 鹅珍珠贝、马氏珠母贝(Pinctadamartensii)、翡翠贻贝(Perna rivularis)Cd．MT具有较好的交叉免疫反应。 farreri)、牡蛎(Crassostrea 3．企鹅珍珠贝Cd．MT间接非竞争ELISA检测方法的建立：通过优化，确定检 测企鹅珍珠贝Cd．MT的间接非竞争ELISA法的最佳反应条件为：以生理盐水为包 测，得全脏器、鳃、闭壳肌、外套膜、内脏团MT粗提液中的Cd—MT含量依次为 15．2l、8．76、38．74、1 相关。 了间接竞争ELISA方法，并在此基础上初步研制了检测企鹅珍珠贝Cd．MT的试剂 盒。精密度和准确度实验表明：该方法的批内相对偏差≤8．7％，批问相对偏差≤ 用此试剂盒对企鹅珍珠贝各组织器官MT粗提液中的Cd．MT含量进行检测，所得 结果与间接非竞争ELISA法的检测结果相一致。 的污染提供了一种快速简便的监测手段。 关键词：企鹅珍珠贝；Cd．MT；多克隆抗体；间接ELISA；试剂盒 Ⅱ EstablishmentofELISAfor Cd-MTofPteria Detecting and ofELISA--kit penguinPreliminaryStudy Abstract chronicaccumulative istoxicto Cadmium(Cd)is toxicant，whichkidney,lung， andblood alsohas and liver,nervoussystem system．Cd environmentsarecontaminatedwithCd Bec