农杆菌介导的枣遗传转化研究.pdfVIP

摘要 Mill．)是我国原产重要果树。枣树由于花小、人工去雄难、坐 枣树(Ziziphusjujuba 果率低且胚败育现象严重，使得其杂交育种非常困难。枣疯病是由植原体引起致死性 传染病害，几乎分布于国内外所有枣区，绝大多数枣树品种都对其敏感，已成为制约 枣产业发展的严重障碍。随着生物技术的不断发展，基因工程已成为现代植物改良育 种的有效手段。本研究旨在探索建立农杆菌介导的枣树遗传转化体系，并利用发根农 杆菌提高枣树对枣疯病的抗性，为枣树遗传改良和枣疯病防治提供技术支撑。主要研 究结果如下： 1．建立了冬枣的花药再生体系。诱导花药愈伤的适宜培养基为1／2MS+I．0mg／L TDZ+0．1mg／L NAA的组 NAA+20∥L麦芽糖+5．59／L琼脂；1．0lIl∥LTDZ和0．4mg／L 合是诱导冬枣花药愈伤出芽的适宜生长调节剂组合，诱导出芽率达100％，平均出芽 数为3．9个／块；0．2mg／L PVA是玻璃苗恢复的适宜组合， BA、0．1mg／LIBA和1．5∥L 根长最长(4．2cm)。 2．首次建立了月光枣的花药再生体系。诱导花药愈伤的适宜培养基为 1／2MS+I．0mg／L 的培养基为：MS+5．59／L琼脂+209／L麦芽糖+0．8mg／LTDZ+4．0mg／LAgN03。其诱导 +0．2mg／LBA+0．1mg／LIBA+I．59／L IBA PVA_中玻璃苗可恢复成正常苗；添加2．0mg／L 的生根培养基中月光生根率最高；GA3的添加对于枣愈伤的生长和玻璃苗的恢复均为 抑制作用。 3．建立了根癌农杆菌介导的冬枣叶片遗传转化体系。适宜的遗传转化条件为：根 +1．OmedLTDZ+0．1mg／LIBA+2009M 基因和蛋白抑制剂基因彳以)转入冬枣中，得到了8个转基因株系。 4．建立了冬枣叶片及冬枣疯组培苗的发根农杆菌介导的遗传转化体系。冬枣叶片 1／2MS+4．0medL CRO，光 照条件为光照／黑暗为14／10h。首次通过发根农杆菌侵染使冬枣疯组培苗转化为正常 植株，得到了30个抗病性提高的转健苗株系。 关键词：冬枣，疯组培苗，遗传转化，房芒基因，蛋白抑制剂基因，根癌农杆菌，发 根农杆菌，枣疯病抗性 transformationofChinese Agrobacterium-mediated jujube Name：Hao Zheng Major．Pomology Liu Superviser：．ProfessorMengjun ProfessorZhaoJin Abstract Chinese an nativefruittreeofChina． jujube(ZiziphusjujubaMill．)isimportant ConventionalCTOOSis difficultinChineseforreasonsof low very jujube very fruit-setting， abortionaswellas smallflower．Withthe of veryhi