日本冬虫夏草(ordyceps japonica)的生物学及活性产物分析.pdfVIP

日本冬虫夏草(Cordycepsjaponica) 的生物学及活性产物分析 摘要 近年来，随着野生虫草资源日益匮乏和市场需求量的逐年增大，国内外学者 对虫草的人工批量栽培、菌丝体和活性产物的开发利用及寻求新型虫草资源做了 大量的研究工作。其中，虫草的子实体栽培技术和活性代谢产物的研究是虫草资 源开发利用的必然环节。多糖和小分子代谢产物(如腺苷)是表征虫草有效成分 的重要指标，也是冬虫夏草质量标准和蛹虫草作为新资源食品的管理办法中规定 的基本指标，是新型虫草资源开发的依据。 日本冬虫夏草是日本和韩国研究较早的一种虫草属真菌，目前已将其作为冬 虫夏草的替代物进行了开发利用，并实现了相关发酵产品的工业化生产。而我国 对其研究较少，尤其在人工栽培和活性产物方面几乎为空白。随着食药用真菌的 开发利用日益受到人们的重视，进一步加大对日本虫草人工栽培和活性产物的研 究无疑具有重要的学术价值和经济社会价值。本文从长白山采集的野生日本虫草 中分离纯化出10株菌种，从中筛选出一株作为实验菌株，运用PCR、GPC、GC、 GC．MS、IR等技术手段，对该菌株的生物学特性、人工栽培和活性代谢产物进 行了研究，主要包括以下几项内容： 1．无性型鉴定及生活史验证：采用形态学鉴定和分子生物学鉴定相结合的 方法，确定了该菌株为日本冬虫夏草的无型性——日本棒束孢，并在此基础上实 现了生活史循环，证明了日本虫草和日本棒束孢是同一物种的不同生长阶段。 2．人工栽培条件优化：以子实体质量和产量为指标，通过单因素实验和正 交实验，确定了人工栽培的最佳培养基和培养条件，即以小麦为原料，原料259， 原料含水量为70％，最适pH为7．0，蔗糖添加量0．4％，子实体最适生长温度为 19．25℃，高温时可适当通气，培养40d，单瓶产量可达4．5769(干重)，生物转 化率最高可达18．304％。培养条件简单，周期短，产量高，具有较大的工业化开 发潜力。 3．多糖的制备与分析：对日本棒束孢的胞外多糖(EPS)、菌丝体多糖(IPSl) 和子实体多糖(IPS2)进行了理化性质、单糖组成和结构的比较分析。EPS含糖 B．型吡喃糖。将日本棒束孢多糖(包括EPS和IPS)与蛹拟青霉、球孢白僵菌、虫 花棒束孢和中国被毛孢多糖的性质进行了横向比较，得出虫草属真菌多糖性质上 的规律：虫草多糖(EPS和IPS)的单糖组成基本相同，均由甘露糖、半乳糖和 葡萄糖组成，其中甘露糖普遍占有较大的比例，葡萄糖含量最少；多糖分子量多 数在20．100kDa之间；主链构型多为p．型，尤其是IPS。本文为研究虫草多糖的构 效关系、开发日本虫草等新型虫草资源奠定了理论基础。 4．小分子产物分析及活性测定：运用乙酸乙酯和正丁醇分别对发酵液、菌 丝体和子实体的醇提物进行萃取，得到六种小分子萃取物。抑菌试验表明，6种 萃取物均具有抑制细菌生长的作用，不能抑制真菌的生长，乙酸乙酯萃取物的抑 菌活性略高于正丁醇萃取物。抗肿瘤实验表明，子实体的乙酸乙酯和正丁醇萃取 物可有效抑锘fJP388细胞和Hela细胞的生长，具有成为新型抗肿瘤药物资源的潜力 和进一步分离纯化的价值。各种萃取物的抗病毒活性均较低或无抗病毒活性。通 过GC．MS方法研究了活性较高的乙酸乙酯萃取物的主要挥发性组分，结果表明， 这些组分大部分都是酮类、酰胺和酯类等含苯基及含氧基的化合物，这些基团活 性较高，易氧化，是日本棒束孢乙酸乙酯萃取物发挥生物活性的重要物质基础。 本文填补了国内外对日本虫草研究的空白，为深入开发日本棒束孢资源、实 现工业化生产以及开发相关产品铺平了道路，具有重要的经济价值和学术意义。 关键词： 日本棒束孢；人工栽培；虫草多糖；生物活性 andsomeactive on Characteristics StudyBiological m of etabolite Cordycepsjaponica Abstract recent the ofwild