枇杷种子退化的胎学机制及中度退化种子株系遗传多样性研究.pdf

枇杷种子退化的胚胎学机制及中度退化种子株系遗传多样性研究 摘要 本研究对多核枇杷品种种子退化及胚败育情况进行了调查，并首次从花药结构、 花药散粉情况、花粉活力、柱头可受性、自然授粉后花粉原位萌发和花粉管生长特性、 胚胎发育解剖观察等方面，系统研究了‘大五星’枇杷的雌雄性器官育性和胚胎发育 过程，探明了多核枇杷品种种子退化及中度退化种子产生的胚胎学基础。采用扫描电 镜技术和ISSR分子标记技术对‘大五星’、‘龙泉l号’、‘龙泉5号’3个栽培品种及其 中度退化种子株系进行花粉亚显微形态和分子遗传多样性分析。同时，在形态学调查 的基础上，从花药结构、花粉亚显微形态、花粉活力、柱头可受性、授粉亲和性、胚 珠结构及胚胎发育过程等方面对少核株系C1和坐果极低且无核的115号株系进行了 系统研究，明确了其少核和结果极少且无核的胚胎学机制。主要研究结果如下： 1．枇杷种子退化和胚败育调查 调查结果表明， ‘大五星’、‘龙泉l号’和‘龙泉5号’3个枇杷品种平均每 育为高度退化种子。3个品种的轻度退化种子、中度退化种子和高度退化种子平均单 退化种子的胚完全败育。 2．‘大五星’枇杷雌雄性器官的育性检测 雌雄性器官的育性检测表明：(1)‘大五星’品种花药较大而饱满，开花当日多 数花药能纵裂散粉；花药结构正常，花粉量很多，畸形花少；开花2--,4d花粉具较高 活力，同时柱头具强可受性。表明‘大五星’枇杷在花期内雌雄性器官的育性强弱具 有同步性，利于自然授粉结实。(2)自然授粉后，花粉粒在柱头上萌发主要集中在开 花2~4d；开花5d约有90％花柱的柱头上有萌发的花粉粒；柱头具可受性的持续时间 长约7d。同一花蕾中不同长度的花柱，柱头花粉原位萌发时间不一致，多数相差2～3d。 (3)多数花粉管能生长到花柱上部，仅30％的花粉管能够生长至花柱基部；近85％ 的胚珠中发现有花粉管，但花粉管在胚珠中弯曲生长或沿珠被生长的现象严重，表明 自然授粉条件下，‘大五星’枇杷表现出一定的受精前障碍。 3．‘大五星’枇杷的胚胎发育 解剖观察表明：(1)‘大五星’枇杷胚珠为倒生胚珠，蓼型胚囊和核型胚乳。(2) 花蕾中多数胚珠能正常受精发育至球形胚和心形胚阶段，部分胚经鱼雷胚阶段发育为 成熟子叶胚。胚乳细胞在大球胚阶段形成，在小鱼雷胚阶段解体。(3)开花14-23d， 胚珠中可见合子、2．细胞原胚、T-形原胚、多细胞原胚、小球胚及扩散至珠孑L端的胚 乳核。开花2948d，多数胚发育为大球胚和胚乳细胞，早受精的胚已发育为小心形胚 阶段；而未受精胚珠的雌性生殖器解体成空胚囊。开花53～64d时，胚胎发育旺盛，胚 珠中可见大球胚、鱼雷胚、小子叶胚及成熟种胚。(4)开花90～120d，果实进入膨大 继续发育为饱满大粒种胚；约3枚胚珠因未受精发生珠心、胚囊解体，最终形成完全 退化种子；另约3枚受精胚珠发育至球胚、心形胚及鱼雷胚阶段，但胚囊内胚乳细胞 和珠心组织提前解体导致其无法继续发育，至果实成熟时形成高度败育的种子；此期 发育至小子叶胚阶段的胚，部分能继续发育为成熟种胚，但因养分及激素竞争处于弱 势，子叶长度和厚度均明显小于正常的种胚，形成中度退化种子。开花64～90d，是影 响受精胚胎能否继续发育的关键时期。 4．中度退化种子株系的花粉亚显微形态多样性 花粉亚显微形态分析表明：(1)正常的枇杷花粉为长球形(P／E为1．42～1．73)， 赤道面观为长椭圆形， 极面观为三裂圆形； 花粉为中等大小 (28．21umx 度退化种子株系中出现发育不良小花粉和变形大花粉的比率较大，其中6个株系花粉 大多数材料的同一花粉3个赤道面上的条纹走向都不一致。‘大五星’、‘龙泉l号’ 和‘龙泉5号’3个亲本品种花粉外壁雕纹属于条纹状、条纹二-穴状(或条纹一穿孔状) 和条纹一颗粒一穴状(或条纹一颗粒一穿孔状)。26份中度退化种子株系的花粉除具亲本 的纹饰外，还出现脑纹一穿孔状雕纹类型：同时中度退化种子株系既具亲本特征的花 粉类型，又分离出其亲本间的过渡类型和原始类型，花粉形态有平行、交叉现象，这 与形态学特征表现出的多样性一致。 5．中度退化种子株系的分子遗传多样性 ISSR标记技术对‘大五星’、‘龙泉l号’与‘龙泉5号’3个亲本及59份中度 退化种子株系的多样性分析结果表明，18条ISSR引物在62份供试材料中共扩增出 Ⅱ 的平均有效等位基因数、平均Nei’s基因多样性指数和平均Shannon