热杨1号再生体的建立及转双抗虫基因的研究.pdfVIP

摘 要 杨树是近年来我国大力推广的速生树种之一，它不仅是重要的防风树种，也 是重要的木材用树。但是，虫害是杨树育种中面临的一个严重问题，化学杀虫剂 容易使害虫产生耐药性并污染环境。因此利用转基因技术培育抗虫杨树新品种已 成为当前植物遗传改良的重要手段。本研究以热杨1号(彻￡，J沁J创z阳册rf∞册 c仉儡聊J’)为实验材料，采用植物组织培养、植物基因工程和分子生物 学的有关技术，建立了热杨1号的再生体系并对双抗虫基因遗传转化热杨l号进 行了系统的研究，实验结果如下：- 1．研究了不同外植体、不同激素浓度配比对热杨l号愈伤组织、不定芽和根 诱导的影响，获得了热杨1号高效再生体系。实验表明以热杨l号叶脉为外植体 的再生能力明显高于其他外植体，并筛选出诱导愈伤组织、不定芽和根的最佳培 养基。切取叶脉接种在MS+6一BAO．5mg／L+N从0．05mg几+蔗糖309／L+琼脂粉 5．59／L的培养基上，经过l周左右开始出现愈伤组织，并且愈伤组织的诱导率 高达90％；把愈伤组织接种到Ms+6一BAO．5mg／L+N从0．05mg／L+IBA0．1mg／L+ 椰子水5％+蔗糖309几+琼脂粉5．59／L的培养基上诱导不定芽再生，25d左右可 看到不定芽的形成，诱导率达87％；再生芽在1／2MS+N从0．05IIlg／L+I队O．15 mg／L+蔗糖209／L+琼脂粉5．59几的生根培养基上经过25d左右可诱导出根， 生根率可达94％。 2．测定了愈伤组织对Kan的抗性，得出热杨l号愈伤组织对Kan的敏感的最 佳浓度为50mg／L。利用农杆菌介导法和基因枪轰击法将一个构建在载体上的双 抗虫基因(BtCryI基因和慈姑蛋白酶抑制剂基因API)转化热杨1号。 3．利用农杆菌介导法进行遗传转化的研究中发现预培养时间、共培养时间、 乙酰丁香酮对热杨l号的遗传转化率均有较大影响。预培养2d、共培养24h，添 mg几+N从O．05 上进行分化筛选培养，3个月后，经过4_6次筛选的抗性愈伤组织部分分化出芽。 转至0 1／2MS+N从0．05 0．15 mg／L+IBA Carloo mg／L+Kan50mg／L培养基上进行生根筛选。 4．利用基因枪法进行遗传转化的研究中，预培养时间、轰击距离对热杨l III 号的遗传转化率有较大影响。确定了基因枪转化热杨1号的有关参数：轰击前， 愈伤组织无需高渗预处理2d，轰击距离：6cm，轰击次数：1次。 5．经农杆菌介导法进行遗传转化所获得的47株转化植株中有45株苗PCR 检测呈阳性。S0uthernBlot检测的结果为4株苗有杂交信号。证明外源双抗虫 基因已整合到热杨1号基因组中。 6．利用基因枪法进行遗传转化所获得的52株转化植株中有39株苗PcR检测 呈阳性，SouthernB10t检测的结果为3株苗有杂交信号。证明外源双抗虫基因 已整合到热杨1号基因组中。 本研究中我们建立了热带杨的双抗虫的遗传转化体系，为利用基因工程技术 进行杨树育种提供了理论依据。 关键词：热杨1号；再生体系； 愈伤组织； 双抗虫基因；遗传转化体系。 Ⅳ Absract iIl iso鹏of Cllil：1a代cently．Many P叩ulus gro谢ng泖idly仃eespopul耐zed 11avebeenllSed iIl varietieshave extc璐iVcly been．蛐porta咀t晰Ildbreakpl锄tings，and 、№odlot l【indsof f如mnle mo心趾d