苹果属观赏海棠cmyb16、mcmyb12的克隆及表达分析.pdfVIP

摘要 花色苷是广泛存在于自然界中的类黄酮物质，是一类从红到蓝到紫的植物色 素，其对植物中花色、叶色、果色的形成具有重要的地位，目前对于花色苷的代 谢途径研究较为深入，植物花色苷的生物合成主要受两类基因调控，一类是结构 基因，直接编码花色苷合成途径中的酶，在不同植物中所共有，另一类是调节基 因，调节基因是调控结构基因的表达活性和表达程度的基因，正是调节基因调控 着结构基因的时空表达，从而决定着花色苷合成的时间和分布，而其中MYB蛋白 是植物花色苷合成途径中涉及最为广泛的调节因子，因此MYB转录因子的克隆对 探究花色苷合成途径进而研究植物色泽形成机理具有重要作用。 以苹果属观赏海棠品种‘王族’叶片总RNA为模板，通过R-T-PCR与RACE 编码255个氨基酸，命名为?I勿?I彳乃J6。氨基酸序列多重比对和系统进化树对 McMYBl6蛋白分析；实时荧光定量PCR和高效液相色谱法对观赏海棠不同品 种不同时期的心M阳J6、讹d日表达量、花色苷含量进行测定分析。结果表明： 与么，?I夕凇4亲缘关系较近。它与尬C饵表达量、花色苷含量成负相关性。推测 该基因为苯丙烷合成途径中的转录抑制子，通过调控公共苯丙烷途径的重要关键 酶基因尬aH的表达开启与关闭从而起到对下游途径的抑制作用。 以苹果属观赏海棠品种‘王族’叶片总IⅢA为模板，通过RT．PCR与RACE 1047bp，编码348个氨基酸，命名为姚M沼J2。氨基酸序列多重比对和系统进 化树对McMYBl2蛋白进行分析，结果表明：d知d彳凇-2与彳脚J2亲缘关系较 近。且其蛋白质三级结构与AtMYBl2也较为相似，其在选用的观赏海棠品种中 的各个时期均有表达，且在新叶有色类品种‘绚丽’、绿色叶品种‘火焰’中的相对 表达量与花色苷含量成负相关趋势，推测该基因与类黄酮代谢途径较为相关，其 可能与彳f?l彻』2具有相似的生物学功能，为黄酮醇代谢合成途径中的特异性调 节基因。 关键词： 苹果属；观赏海棠；类黄酮；花色素苷；MYB转录因子 II ABSTRACT isone ofnaVonoid iIl isa Amhocyanin type widelyexistingplams，andplam redto acriticalroleiIlthefomation p逸ment丘omblue，topulple．Anthocyanillplays of andnitcolors．Therehasbeen硫ensiVeonits nowe‘r，leaf study metabolic of is t、^，o of path、)~，够Thebiosynthesisplant肌thocyanillmailllyregulatedby types encodethe iIl and its route genes：stmcturalgenesⅦrhichdirectly enzymes symhetic are shareddifjf．erent which the by plams；龇1dregulato巧genesregulatee)中ressiIlg and ofstmcturaJ isthelatter’s ontheformerts activitydegree genes．It regulation thatdecidestheoccurrencea1