葡萄球菌分离株毒素基因型分析及两种毒素的表达纯化.pdfVIP

中文摘要 葡萄球菌肠毒素(Staphylococcalenterotoxin，SE)是由葡萄球菌产生的一类外 毒素，是引起人类食源性疾病的重要致病因子。葡萄球菌肠毒索基因可通过噬菌 体转导，整合了、转座．了、质粒等分了元件的转移导致新型肠毒素的不断产生， 了解新型肠毒素蛋白的结构与功能，建立相应的检测评价方法具有重要意义。 本研究通过生物信息学分析，设计了不同葡萄球菌肠毒素基因(sea，see， 的PCR检测引物，通过葡萄球菌DNA提取、PCR条件优化等，建立了16种不 同肠毒素基因_犁特异性检测的PCR方法。 应用建立的基因分型检测方法，对分离自生鲜牛奶、奶酪、土壤，人、猪、 牛、羊、鸡等动物性产品或动物体表、环境中122株葡萄球菌分离株肠毒素基因 型的检测，初步了解了葡萄球菌国内分离株肠毒素基因的分布情况，结果表明： (1)除se／／型阴性外，其它16种基因型均有检出，95．9％的葡萄球菌含有至少 一种SE基因，110株含有一种以上SE基因(90．2％)，其中47．5％的菌株携带至 少5种以上的肠毒素基因型，表明肠毒素基因簇(egc)广泛存在于葡萄球菌国 内分离株。肠毒素型检出率最高的三利，肠毒素基因为tsst，sei和seb，分别为 62．3％， 54．1％和46．7％，未检出sell型肠毒素。(2)除金黄色葡萄球菌、木糖 葡萄球菌、中间葡萄球菌、表皮葡萄球菌等已报道的葡萄球菌外，我们分离的非 致病性葡萄球菌菌株(猪葡萄球菌、华纳氏葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、松鼠葡萄 球菌、腐生葡萄球菌、克氏葡萄球菌、鸡葡萄球菌、耳葡萄球菌)也检测到多种 葡萄球菌肠毒素基因。动物非致病性葡萄球菌分离株可携带多种肠毒素基因，为 食品安全带来新挑战。(3)葡萄球菌菌株的致病性与其种类、携带肠毒素的种类、 分离来源密切有关。分离自病样，感染能力较强的菌株，产生的肠毒素种类和数 量都多；猪源和鸡源的葡萄球菌携带除了seO以外的16种肠毒素基因型，兔源 和人源携带了除selj和sec以外的15种。 通过设计sea、selo肠毒素基因表达引物，从含有肠毒素基因簇的葡萄球菌 GenBank已报道序列完全一致， selo发生点突变，但该突变为同义突变。应用 化大肠杆菌BL21宿主菌，经诱导后获得了重组融合蛋白，重组蛋白分别占菌体 蛋白的26％和22％。经亲和层析纯化获得重组肠毒素蛋白，Western．Blot检测表 明，表达的重组蛋白能够被SEA和SEO阳性血清识别，具有良好的抗原性。 SEA 关键词：葡萄球菌肠毒素基因型PCR SEO蛋白表达 ABSTRACT isoneofthemostcommonand bacterium． Staphylococcus importantpathogenic Somestrainsareableto arethe enteonoxins(SEs)．which producestaphylococcal causativeof food thataimat the agentsstaphylococcalpoisoning．Methodsdetecting of taskbecausenew enterotoxinsremaina serotypes comprehensivetypes challenging to ofthetransferof ofenterotoxinscontinue means emergeby plasmid．t