葡萄籽原花青素离提纯、组分鉴定及抗氧化性研究.pdf

摘要 葡萄籽中富含葡萄籽油和原花青素，是一种可供选择的极好的保健品原 料。葡萄籽油中含有13％--15％的油脂，其中亚油酸的含量达到76％以上， 是一种优质保健用油。葡萄籽中原花青素含量也极其丰富，其中低聚原花青 素(--聚体～四聚体，OPC’s)有强抗氧化能力，可以清除体内的自由基和活 性氧，能预防80多种因自由基引起的疾病包括心脏病、关节炎等，可被广 泛应用到药物、化妆品和功能性食品等领域。然而在我国，该方面的理论研 究尚处于起步阶段，我们的产品大多为提纯的初级产品，质量不稳定、抗氧 化能力不强、价格较低。通过本课题的研究，提出了一套完整的提取葡萄籽 油和原花青素的工艺，特别是提出合理的纯化、分离低聚原花青素的方法和 工艺。主要结论如下： 1．以超临界萃取技术提取葡萄籽油。通过单因素实验，得到的提取最 佳萃取条件为：萃取压力30MPa，萃取温度45。C，萃取时间80rain，物料的 适宜水分含量约为6％。 2．在超临界萃取技术提取原花青素方面做了初步的理论研究和探索。 产物的薄层层析结果显示，在夹带剂甲醇或乙醇存在时可以在一定范围内增 加儿茶素及低分子酚酸在C02流体中的溶解度，且甲醇增加提取率的效果要 好于乙醇。进一步以HPLC-MS联检技术分析产物的成分组成，在产物中检 测出儿茶素、表儿茶素和两种二聚体，说明在夹带剂甲醇或乙醇存在时提取 高抗氧化性的二聚体是可能的。但由于原花青素化学结构的原因，总体提取 率仍较低。 3．在溶剂提取的单因素实验基础上通过正交实验，得到脱脂葡萄籽中 原花青素的最佳提取条件为：80％的乙醇浸提90min，于温度60*(2，pH值 5．0，料液比l：6的条件下浸提3次。原花青素粗品的提取率为16．7％，纯度 58．3％。 4．研究了大孔树脂柱层析纯化原花青素技术。通过静态和动态吸附、解 吸试验筛选出HPD600为最适宜的树脂。同时用Langmuir单层吸附模型拟 合比较各树脂的平衡速率常数，获得了良好的相关性，说明大孔树脂对原花 青素的吸附主要为单分子层吸附。当上样流速为0．60mL／min，洗脱流速为 0．38mL／min时分离纯化效果最好，吸附率、解吸率分别为60％和97．7％， 原花青素的纯度可达95％。对产物的薄层层析分析结果显示分离得到的原花 青素为多种聚合物的混合物。 5．以聚酰胺柱层析技术研究确定了纯化及提取高OPC’S产物的方法。 通过单因素实验确定上样流速为0．45mL／min，上样浓度在5～8 m趴nL时较 为适宜。用80％丙酮洗脱，解吸率最高，产物的纯度为92％；同时可以适当 增加洗脱的速率(高于lmL／min)以达到较高的生产率。分级洗脱试验数据 表明，绝大部分的原花青素被60％的丙酮溶液解吸附，其次是用40％和80％ 的丙酮洗脱，20％浓度的丙酮未能解吸下来原花青素。 6．对聚酰胺分级洗脱产物用改进的Fenton化学发光法测定了其清除羟 自由基的能力。结果表明，粗提物的抗氧化性好于儿茶素对照品，也远远好 于市售产品。分级洗脱后各片段抗氧化性明显提高，其中80％与40％的丙酮 洗脱物的抗氧化性约为对照物儿茶素的3倍。 7．将20％、40％聚酰胺分级洗脱产物进一步用高效液相色谱．质谱联检 技术进行了定性分析。确定了在20％丙酮洗脱溶液中包含儿茶素、表儿茶素 及两种二聚体：在40％洗脱溶液中确定了四种二聚体。 8．以改进的凝胶渗透色谱测定了40％、60％、80％丙酮分级洗脱产物的 平均分子量和平均聚合度。以丙酮-8M尿素溶液(6：4)为流动相，测得40％、 合度为5．5，6．5和9．0。 9．在原花青素稳定性研究中，模拟了食品体系条件，研究了各处理参 数对原花青素稳定性的影响。结果表明，在较低的温度和较低的pH值条件 下原花青素比较稳定；金属离子中以Sn2+、Fe2+和cu2+的影响最为显著； 光照可使葡萄籽原花青素降解损失；Ve和亚硫酸氢钠可以提高原花青素的 稳定性，且提高的效果同浓度有关；另外，在不同pH值条件下原花青素呈 现不同的颜色反应。 10．为保持原花青素的稳定性，采用了微胶囊包埋技术。结果表明，以 明胶、阿拉伯胶、蔗糖为壁材包埋多孔淀粉．原花青素复合物的包埋率均较低： 而15。环糊精也不适合于包埋葡萄籽原花青素。以麦芽糊精．大豆分离蛋白包 埋原花青素获得了良好的包埋效果。当芯材：壁材为6：94，进风温度210℃， 出风温度67℃时的包裹效果最好。