葡萄种质资源rpd分析及亲缘关系研究.pdfVIP

摘 要 葡萄在长期的进化和栽培历史中，由于本身的变异、自然杂交、栽培环境不 同等形成了不同的品种类型，使得葡萄的分类鉴定难度加大，命名混乱。本试验 以欧亚、欧美杂种部分品种及砧木品种为材料，应用RAPD分子标记技术，对53 个葡萄样品的遗传多样性进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)研究，通过NTSYS pct.10e软件对RAPD的扩增谱带进行分析，进行葡萄品种的分子鉴定和分类研 究，探讨葡萄品种之间的亲缘关系。其主要的试验结果如下: 1.通过采用CTAB,SDS和高盐低PH法三种DNA提取方法提取葡萄幼嫩叶片 DNA，分别对其进行紫外吸收检测、电泳检测和RAPD检测，结果表明;三种方法 DNA完整性好，RAPD扩增带清晰，A260/A280的值在 1.7-2.0之间，符合RAPD 反应的要求，都可用于葡萄基因组DNA提取。其中以CTAB法提取的DNA质量最 好，本试验选用CTAB法进行。 2.通过对模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP和M犷浓度的优化试验及 对PCR反应程序的筛选，确定了本研究的适宜反应体系和反应程序。反应体系: 25u1反应体系中，含2.5u1IOXbuffer(PH=8.8),50ngDNA,0.4umo1/L随机引 物，200umo1/LdNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)，1UTaqDNA聚合酶、2.OMMMgt 以及纯净水15.5ul。反应程序为:94℃预变性2min;94℃变性lmin;36℃退火 lmin;72℃延伸2min;39个循环;72C延伸5min;4℃保温。 3，利用对280个引物进行筛选所得到的33个引物对53个葡萄样品进行RAPD 分析，扩增片段大小为300-3000bp，共检测到325个位点，其中275个是多态 位点，多态位点百分比达到84.6%。平均每个引物获得9.85个扩增位点，其中 具有多态性的位点为 8.33个。各品种间多态位点百分比变化范围为 58.3-100.0%，其中多态位点百分比最高的是引物 S60,5514,S1399,S1478, 32122,S510,S1468,S6和5284，最低的是引物5216。这说明了本试验所用的 53份材料的遗传多样性很高。 4.通过对两个同名高妻及其亲本的遗传距离和指纹图谱分析，并结合形态学 分析，从分子水平上对其两个品种进行区分，从而为纠正目前品种命名杂乱的现 状提供依据。 5.利用RAPD技术对53份葡萄材料进行分类研究，通过聚类分析，估算遗传 距离，建立树状图;利用分子手段对葡萄遗传变异和亲缘关系进行研究，为葡萄 遗传多样性的保护以及保护策略的制定提供了科学的依据，也为葡萄育种提供了 一个有价值的参考，同时在果树遗传理论研究与育种相结合上作了有益的探索。 关键词:葡萄 种质资源 RAPD 亲缘关系 Abstract Owingofthevariationwithinthespecies,easilynaturecrossbetweenspeciesand widegeneration,differeptplantingenvironmentintheworld,manyspeciespopulations andvariety.groupsofGrape(vitis)havebeenforminginthelonghistoryofgrape evolutionandculturing,whichmaketaxonomyandidentificationofgrapesdifficult andnamingconfusing.Thestudywasundertakentoidentifygrape(vitis)materialof severalgrapesofVvinfieraL.andV.1abruscaL.androotstockbyRAPD.Thispaper mainlystudiesthegeneticdiversityof53seriesgrapesonRAPD.Theaimofthe studiesontheamplificationpatternsofRAPDgotbyNTSYSpc2.l0eisto identificateandtaxonomygrape,studylinkagedistance.Themainresultsasbelow: 1.T