牡蛎低分子活性肽BPO-L对人肺腺癌A549细胞周期和相关癌基因、抑癌基因表达的调控作用.pdfVIP

维普资讯 第 47卷 第 l期 厦 门大学学报(自然科学版) VoL47 NO．1 2008年 1月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Jan．2008 牡蛎低分子活性肽 BPO-L对人肺腺癌 A549 细胞周期和相关癌基 因、抑癌基 因 表 达 的 调 控 作 用 李祺福 ，黄大川，石松林 ，梁 盈，李筱泉 (厦f-j大学生命科学学院，细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，福建 厦f-j361005) 摘要：采用酸抽提、凝胶柱层析等方法，从僧帽牡蛎体内分离提取到牡蛎低分子活性多肽组分BPO-L，以HMBA处理 组为平行对照，流式细胞仪检测细胞周期变化及 以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化．研究BPO-L 对人肺腺癌 A549细胞分化的生物学效应 ，探索其对肺癌细胞的作用机理．实验结果显示 ，BPO-L能有效抑制 A549细胞 增殖活动，促使细胞阻滞于G。／Gl期．在此过程中，A549细胞 c-myc，MTp53等癌基因蛋 白表达减弱，p21 和 Rb 等抑癌基因蛋白表达活性的增强．本研究证实BPO-L对肺癌细胞具有显著的诱导分化作用．其诱导癌细胞分化机理与 其调节和干预 c-myc、MTp53等癌基 因与 p21wA 和Rb等抑癌基 因的表达有关． 关键词 ：人肺腺癌 A549细胞；牡蛎低分子活性肽；细胞周期；癌基因与抑癌基因；诱导分化 中图分类号：Q254；Q28 文献标识码 ：A 文章编号 ：0438—0479(2008)01—0104—07 海洋天然活性物质抗肿瘤研究是抗癌药物研究的 将鲜活的牡蛎 (取 自厦 门海域)加人 pH8．0的 一 个重要领域L1]，国内外学者已相继从海洋动物 中 Tris—HC1溶液匀浆后离心 ，取沉淀进行酸抽提，所得 提取出一系列具有抗肿瘤作用的萜类 、生物碱、大环聚 粗提液过 SephadexG-50进行分级分离 ，收集第 2个 酯、肽类、聚醚等化合物，这显示从海洋生物中寻找抗 洗脱峰(BPO-L)，SephadexG-25柱脱盐 ，冷冻干燥后 癌新药有着广阔前景．我们先前的研究[3 也已表明， 备用． 从进化地位低、具有原始性特征的动物 中寻找能干预 1．2 细胞培养与诱导处理 细胞信号传导、调控细胞增殖分化 的低分子活性肽是 人肺腺癌 A549细胞 (引 自武汉大学中国典型培 一 条新的可行途径．牡蛎是一种具有药用价值 的海洋 养物保藏 中心)培养于 RPMI-1640(Gibco)培养液中 经济贝类动物，国内外报道了牡蛎粗提液具有抗肿瘤 (内含 15 热灭活小牛血清 、100~／g／mL青霉素、100 作用[5]，但 目前尚缺乏对牡蛎抗肿瘤活性物质 的分 ~／g／mL链霉素、50~／g／mL卡那霉素，pH7．2)，37℃培 离提取与抗肿瘤机理研究．我们则从牡蛎中分离 出天 养 ，24h后进行药物处理．经分离纯化冻干的BPO-1 然低分子活性肽 BPO-L等组分口 ]，并鉴定 了这一组 溶解于 D-HankS液 中配制成 7mg／L的干液 ，0．22 分对肿瘤细胞 的生物学效应．为此 ，我们在这一基础上 m微孔滤膜过滤除菌，并用培养液配制成不同浓度 进一步研究BPO-L对人肺腺癌A549细胞增殖、细胞 的作用液 (0．06mg／mL，0．10mg／mL，0．15mg／ 周期及相关基因表达的影响，以探索牡蛎低分子天然 mL)．弃实验组细胞旧培养液换上含有 BPO-L的培养 活性肽 BPO-L的抗肿瘤作用机制，为牡蛎天然活性肽 液，对照组细胞同时换上不含 BPO-L的新鲜培养液 ，