猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株ORF3-7基因克隆与序列分析.pdfVIP

维普资讯 496 中 国兽 医学报 2008年5月 第28卷 第5期 ChinJVetSci May2008 Vo1．28 No．5 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株 ORF3~7基因克隆与 序列分析 尹彦涛，夏平安 ，崔保安，王建举，党 占国，柴春 霞，陈红英，李新生 (河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002) 摘要 ：参照GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)美洲株 ATCCVR2332的 ORF3～7基 因序列， 利用Primer软件 分别设计合成 了针对 PRRSV 0RF3、ORF4、ORF5、ORF6和 ORF7基 因的特异性 引物，利 用 RT— PCR从河南分 离株 Hn一1／06株分别扩增得到 了大小约 964、675、718、566和 5O1bp的片段 ，并将扩 增的片段插入 PGEM—T—easy载体进行测序 。利用 DNAStar软件进行序列分析表 明，河南分离株 Hn_1／06株属于美洲型，同时 将 Hn_1／06株 ORF3～7基 因的核苷酸序 列和推导氨 基酸序 列与 ATCCVR2332、LV、Resp、CH一1a、BJ一4、S1、CC一 1、HB_1、JXO612、HUB1等分 离株进行 了同源性 分析 。 关键词 ：PRRSV；河南分离株 Hn_1／06株 ；oRF3～7基 因；克 隆与序列分析 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4545(2008)05—0496—05 CloningandsequencingofORF3—7genesforporcinereproductiveandrespiratory syndromevirusisolated inHenanprovince YIN Yan—tao，XIA Ping—an’，CUIBao—an，WANG Jian—ju，DANG Zhan—guo，CHAIChun—xia，CHEN Hong—ying。LIXin—sheng (CollegeofAnimalHusbamdryandVeterinary，HenanAgricultural University。Zhengzhou450002，China) Abstract：FivepairofspecificprimersofPRRSV CIRF3toORF7weredesignedandsynthesizedaccordingtothe publishedgenesequenceofPRRSV from GenBank(PRU87392)，andORF3，ORF4，ORF5，ORF6，ORF7genesof PRRSV Hn一1／06strainwereobtainedbv RT—PCR method．TheRT—PCR productsweredirectly clonedintothe PGEM—T—easyvectorandtheserecombinantplasmidsweretransformedintoJM 109competentcell，identifiedbyen_ zymedigestingandDNA sequencing．ThepositiveclonesweredesignatedPGEM —T—ORF3，PGEM—T—ORF4，PGEM — T—ORF5．PGEM—T—ORF6。and PGEM—T—ORF7，respectively．After sequencing，the sequences ofORF3，ORF4， ORF5．ORF6，ORF7genesofthePRRSV Hn一1／06isolatewerecomparedwith sequencesofothertendifferent PRRSV strainsinGenBankbyBlastandDNAStarsoftware．TheresultsshowedthattheHn-1／06displayedhigh nucleotideidentitieswith strainVR22332．butdistinctfrom L