实验十一温度水份胁迫植物生长调节剂对植物生长及某些生理特性的.pptVIP

* 实验十一 温度/水份/胁迫/植物生长 调节剂对植物生长及某些 生理特性的影响 掌握科研论文的撰写方法； 学会设计观察温度、水份、胁迫、植物生长调节剂对植物生长 发育影响的实验方案； 掌握三种植物生理指标（如丙二醛含量、过氧化物酶活性）的 测定方法 实验目的 一 根系活力的测定 (α－萘胺氧化法) 根系是植物吸收水分和矿质元素的主要器官。根系活力影响着根对水分、矿质元素 的主动吸收。本实验的目的在于掌握一种常用的根系活力测定的方法和原理。 α－萘胺氧化法 【实验原理】 α－萘胺 （无色） 吸附在根系表面 被根氧化 α－羟基－1－萘胺 （红色） 4. α-萘胺在空气中会被自动氧化 1. 根表颜色越深→根活力越强（定性测定）（2－3天） （酸性） 3. 剩余α-萘胺 + 对氨基苯磺酸 + 亚硝酸盐 → 生成红色偶氮染料 →比色（定量测定） 2. 原有α-萘胺 –剩余的α-萘胺=被氧化的α-萘胺量（代表根系活力强弱） 洗净 加入 α－萘胺 25ml A处理：各取2g根 三角瓶中 吸干 磷酸缓冲液 25ml 根浸没 静置10min B处理： 三角瓶 加入 α－萘胺 25ml 磷酸缓冲液 25ml 静置10min 2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶 加水10ml 加 对氨基苯磺酸 1ml NaNO2 1ml 放置5min 转红色 定容至25 ml 20～60min内 分光光度计510nm读A值（始点数值） 【实验步骤】 取3只100ml三角瓶，2只作以下A处理，1只作B处理 3. 取完2ml后，三只三角瓶立即置25℃氧化1hr后，同2测定 2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶 加水10ml 加 对氨基苯磺酸 1ml NaNO2 1ml 放置5min 转红色 定容至25 ml 20～60min内 分光光度计510nm读A值（终点数值） A处理： 始点数值 终点数值 B处理： 始点数值 － 终点数值 ＝ 自动氧化数值 4. 计算 被氧化的α－萘胺 量（μg /g FW·hr) = (始点浓度－自动氧化浓度－终点浓度）×25ml / 2g · 1hr 5. 绘制α－萘胺标准曲线 用50μg/ml α－萘胺母液配制浓度0，5，10，15，20，25，30 μg/ml的α－萘胺溶液 同步骤2测定 2. 各取2ml溶液至25ml容量瓶 加水10ml 加 对氨基苯磺酸 1ml NaNO2 1ml 放置5min 转红色 定容至25 ml 20～60min内 分光光度计510nm读A值 以α－萘胺浓度作为横坐标，A作为纵坐标绘制标准曲线。 【实验原理】 过氧化物酶是植物体的一种保护酶，可以清除体内的自由基，避免对植物的伤害。 过氧化物酶 H2O2 + 愈创木酚 茶褐色物质 二 过氧化物酶活性的测定 【实验步骤】 酶液的提取：精确称取植物1g，加 KH2PO4 4ml，研磨成匀浆，4000r/min离心 15min取上清液，残渣再加3ml KH2PO4提取，合并上清液（用 KH2PO4稀释10倍） 比色：1cm比色皿2只（一只作零参比，一只酶液） 470nm 反应混合液（H2O2，愈创木酚）3ml， KH2PO4 1ml （开启秒表）→ 每1min读数 1次（读5min） 反应混合液（H2O2，愈创木酚）3m