遗传互作图谱揭示癌细胞的脆弱性.pdfVIP

遗传互作图谱揭示癌细胞的脆 弱性 胡垚 文章结构 • 介绍背景 • 介绍遗传互作案例 • DiE图谱极其应用 • 总结 背景 • 癌细胞具有较多突变基因 • 癌细胞突变基因的“脆弱性”提供了治疗 指导 案例 BRCA1 抑癌基因 BRCA2 控制DNA修复 聚腺苷酸二磷酸 PARP1 核糖转移酶-1 DiE图谱 实验过程 • 选取分别来自乳腺，胰腺，卵巢中的六组 癌细胞系 • HCT116细胞系作为对照组 - - - - - - - - • PTTG / , BLM / , MUS81 / , PTEN / and + - KRAS / 为实验组 • 筛选亲本并且用siRNA转染并将shRNA靶 向每个基因 shRNA • 短发夹RNA • 包括两个短反向重复序列。随后在连上5-6 个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子 • 将siRNA序列作为“短发夹”克隆进质粒载 体中。该发夹序列被表达出来后，形成一 个“双链RNA” （shRNA ），并被RNAi通道 处理。 过程 • 野生型细胞与突变细胞的筛选 • 副产物分析 • 制作探针 • 基因芯片技术 筛选原理 互作结果示例 结果分析 DiE网络的用途 • 功能关系研究 • 建立功能关系模型 • 发现非典型基因功能 • 揭示目标缺陷 • 评估不同mRNA的表达差别 功能关系研究 PTTG1 编码 分离酶抑制蛋白 抑制 有丝分裂重 要酶 ESPL1 编码 分离酶 若缺乏分离酶抑制蛋白导致 细胞停留在 有丝分裂后期 功能关系研究 DNA复制损伤 反应调控因子 TOPBP1 激活 ATR 表达 沉默 γH2AX焦点