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脂肪酸甲酯图谱分析方法 脂肪酸甲酯图谱分析方法 胡桂萍 胡桂萍 福建省农业科学院农业生物资源研究所 福建省农业科学院农业生物资源研究所 1. 脂肪酸甲酯图谱法的原理 1. 脂肪酸甲酯图谱法的原理  PLFAs的组成和含量水平具有种属的特异性  周转迅速，对环境因素的变化敏感  不同微生物具有不同的PLFAs 种类  微生物的PLFA含量与微生物生物量具有一定的比例关系 2.磷脂脂肪酸生物标记法的应用 2.磷脂脂肪酸生物标记法的应用 应用： 应用：  微生物的鉴定  微生物的鉴定  微生物群落结构多样性  微生物群落结构多样性 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 操作方法  1. 在人工培养基中纯化培养微生物  2.萃取法抽提脂肪酸，采用气相色谱分析 (Gas Chromatography)得到定性及定量的 脂肪酸再现性成份描述  3.利用Sherlock软件进行GC图谱识别并与 菌种脂肪酸数据库比对，得到菌种鉴定结 果 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 操作流程 细菌培养 皂化、甲基化 萃取 气相分析 鉴定报告 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 提取过程 提取过程 注意事项： 1、最佳的获菌区域为第三区。 2、皂化时：利用沸水浴或循环水浴。不要使 用加热板或其它加热的方式，因为它们传热 不充分。注意盖子的气密性。 3、甲基化：水浴时间和温度如果超过要求， 可能会降解环丙烷复合物，从而改变脂肪酸 图谱和峰的命名。 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 G G C C 谱 谱 图 图 告 告 报 报 定 定 鉴 鉴 结果 结果 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 2.1 FAME图谱分析方法在微生物鉴定中的应用 结果说明： 结果说明： SI0.500 典型的菌种 SI0.500 典型的菌种 0.300SI0.500 非典型菌种 0.300SI0.500 非典型菌种 SI0.300 数据库没有此菌种,最接近的相关菌种 SI0.300 数据库没有此菌种,最接近的相关菌种 如果试验过程中SI0.500有多个，取SI指 如果试验过程中SI0.500有多个，取SI指 数最高为鉴定结果。 数最高为鉴定结果。 2.2 FAME图谱分析法在微生物多样性研究的应用 2.2 FAME图谱分析法在微生物多样性研究的应用  总FAME图谱中某些特征脂肪酸对细菌、真  总FA