luxsai-型密度感应系统对禽致病性大肠杆菌的调控研究.pdf

Anhui AgricμLtural University Master Dissertation The Regulation of Quorum Sensing of LuxS/AI-2 in Avian Pathogenic Escherichia coli Candidate: Bai Hao Supervisor: Professor. Qi Ke-zong Professor.Yu Sheng-qing Associate Professor.Han Xian-gan Academic Degree applied for: Master of AgricμLture Major: Basic Veterinary Science Direction: Animal Pathology and Biological Prevention College: College of Animal Science and Technology June 2013 国家自然科学基金资助项目： 《信号分子AI-2 对禽致病性大肠杆菌的调控作用研究》 项目编 《禽源致病性大肠杆菌HPI 毒力岛缺失株构建及其致病性研 究》 项目编 摘 要 禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli, APEC)引 起的严重影响养禽业的传染病之一。LuxS/AI-2 型密度感应系统广泛存在于革兰氏阴 性和阳性菌中，可产生用于细菌种间交流的通用自诱导信号分子AI-2(Autoinducer-2, AI-2) ，在细菌的许多生理功能中扮演着重要的角色。目前禽致病性大肠杆菌复杂的血 清型和广谱的耐药性，给禽大肠杆菌病的防控提出了新的挑战, 该菌LuxS/AI-2 型密 度感应系统的研究国内外尚未见报道。 本研究旨在通过对APEC 的LuxS/AI-2 型密度感应系统探究，为防控APEC 感染， 从细菌群体角度提供了新的思路，为进一步研究密度感应系统对APEC 的调控功能和 机理提供参考。 1.禽致病性大肠杆菌AI-2 的检测及其因素分析 为探讨 APEC 中是否存在 LuxS/AI-2 型密度感应系统。利用哈维弧菌 BB170 (vibrio harveyi BB170)对APEC 是否产生信号分子AI-2 进行检测，结果表明APEC 能 产生自诱导信号分子AI-2 。 为探讨禽致病性大肠杆菌在不同生长时期和不同培养条件下，信号分子 AI-2 活 性与luxS 和pfs 的转录水平之间的关系。本研究利用哈维弧菌BB170 检测不同生长时 期和不同培养条件下APEC 的AI-2 活性。同时利用Real-time PCR 检测APEC 不同生 长时期和不同培养条件下luxS 和pfs 的转录水平。结果表明，APEC 在不同生长时期 的AI-2 活性与luxS 的转录水平保持一致，而与pfs 的转录水平则并不一致。对影响 AI-2 活性的因素研究表明，葡萄糖，麦芽糖和NaCl 可增强AI-2 活性和luxS 转录水 平，而蔗糖则下调AI-2 活性和luxS 转录水平。 2. 禽致病性大肠杆菌AI-2 的合成及其对生物被膜的影响 通过对APEC 的luxS 和pfs 基因的克隆、表达和纯化，成功获得了可用于AI-2 体外合成的可溶性重组蛋白LuxS 和Pfs 。 利用纯化后的 LuxS