光刺激对母鸡间c-fos基因表达的影响.pdf

摘要 目的：通过对FOS蛋白的检测，来确定由光照刺激引起的c—fos基因在母鸡间 脑内的表达，由此来探究光照对鸡生殖性能——即母鸡产蛋量的影响，为进一步了 解光照对鸡产蛋的影响机理打下基础。 方法：首先，对母鸡进行光照刺激，将母鸡右眼遮光7天后接受201x的光照刺 激1．5h，暗适应1．5h。经遮光和光照刺激后，用两种方法检测FOS蛋白：1)免疫 组化方法，灌流固定，取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测c—fos基因在间 脑的表达，确定FOS蛋白出现最多的神经核团：2)蛋白印迹法，对母鸡进行光照刺 激后，直接断头，将鸡头在冰上迅速冷却，然后在低温环境下剥离出鸡脑。将剥离 出来的鸡大脑用锡纸包好，迅速放于-80℃冰箱中冷冻。将冷冻后的鸡脑捣碎，10000 转／秒离心，提取上清液，测出提取液中的蛋白含量，然后用蛋白印迹法来验证提 取液中是否含有FOS蛋白，以此来再次验证FOS蛋白在鸡脑中的存在。 结果：1)免疫组化结果显示，经DAB显色后Fos样免疫反应阳性物质呈棕黄 色颗粒，细胞核与胞浆都有Fos蛋白的表达，但主要位于细胞核内，间脑内有大量 Fos样免疫反应阳性神经元，主要见于左侧，分布于圆核(ROT)、室旁核(PVN)、 和PVN内免疫反应阳性神经元最多。2)蛋白印迹法(westernblot)检测的结果显 示，49kD到90kD问有明显特异条带，即FOS蛋白条带，证明在母鸡脑蛋白提取液 中有FOS蛋白存在。 结论：在这些核团中，Fos样免疫反应阳性神经元多，而且多呈强阳性或阳性， 这表明这些核团的神经元在光信息光信息传递中起重要作用。而这些神经核团与鸡 生理和生产机能调节又密切相关，以此来推论出，光照通过这些核团接受光刺激从 而影响产蛋量的。 关键词：母鸡；间脑；c-fos基因；免疫组织化学；Westernblot the in Influenceon ofc—fos stimulationhen expressiongenebylight diencephalons Graduate：DiHui Advisor：Prof．HnMan Medicine Major：．ClinicalVeterinary Abstract． objective：Tothe of informationin SOas investigatepathwayoptical diencephalon todosomebasicworkfor themechanismontheeffectof on illuminating light egg—laying． Methords：Afterablinderto darkfor7 receiveda wearing keep days，therighteyes stimulationof20Luxfor1．5hand indark for light kept again1．5h．Followingperfusing with brainswereremovedandweremadeintocontinuoussections． fixative，their paraffin immunohistochemicalofC-fos in was