共表达猪繁殖与吸综合征病毒e、m和n基因重组腺病毒的构建.pdf

摘 要 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine and reproductiverespiratory 病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度接触性传染病，该病传播迅速，临 床症状表现为母猪晚期早产、流产、死胎、术乃伊胎，仔猪存活率下降利育成猪的呼吸道疾病等。 范围内广泛流行，造成了重大的经济损失，严重危害了养猪业的发展。各国学者纷纷研制各种疫 苗，来控制PRRSV的蔓延，腺病毒载体因其自身的优越性，由此受到广泛的关注和应用。 本试验利用复制缺陷型腺病毒载体首次成功构建了共表达PRRSV囊膜蛋白(EP)、基质蛋 白(MP)和核蛋白(NP)的重组腺病毒。在构建重组腺病毒的试验中，首先用反转录聚合酶链 用具有白裂解功能的口蹄疫病毒2A多肽的核苷酸序列依次串联起来，然后将连接好的 后将重组腺病毒质粒经Pac 重组腺病毒。对重组腺病毒进行传代培养，之后提取4、6、8、10代病毒的基因组进行PCR扩 增，证实外源基因在重组腺病毒中能够稳定遗传。最后，用蚀斑测定和TCID50的方法来检测病 毒的毒价。本试验为研制共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒E基囚、M基囚和N基因的复制缺陷 型腺病毒活载体疫苗奠定了基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒，E基因，M基因，N基因，复制缺陷型腺病毒载体 Abstract as Porcine and knownblueeardiseaseis reproductiverespiratorysyndrome(PRRS)，commonly causeda and disease by reproductiverespiratorysyndromevirus(PRRSV)，ahighlycontagious porcine thatcanleadtoSOW andthedecreaseof and miscarriage，prematurebirth，stillbirth，mummiesviability ofPRRSVisabout15kband have eight pigletsseverelyrespiratorysymptoms．Thegenome open flames．GP2 andGP4 arecoded and E ORF2，ORF3ORF4，that reading protein，GP3protein protein by andN arecoded andORF7．E、MandN havea protein，M protein byORF5，ORF6 protein good protein make ofPRRSV．PRRSVis inthe worldwide， immunogenicity,whichupmajorantigen widelyprevalent causesecono