嗜碱芽孢杆菌n6-5碱性β-甘露聚糖酶的嗜碱机制研究.pdfVIP

摘要 蛋白质在碱性条件下保持活力和稳定性的机制是蛋白质工程中的研究热点，但由于 涉及到的机理复杂，对其研究还很少，本研究以嗜碱芽孢杆菌N16—5产生的嗜碱13一甘 露聚糖酶为研究材料，对蛋白质在碱性条件下保持活力和稳定性的的嗜碱机制进行了初 步的研究。 本研究首先对从嗜碱芽孢扦菌N16．5基因组中分离得到的嗜碱B一甘露聚糖酶基因 通冒的筛选方法，筛选得到一个最适pH发生改变的突变体，对其一级结构和空间结构 的变化进行了测定和预测，一级结构测定表明共有两个突变位点变化，为了分析是单个 的位点的变化导致的酶的特性变化，还是二者共同作用导致的，构建了单一突变的嵌和 体，结果发现是甘氨酸(A)到缬氨酸(V)的变化导致了突变体酶分子的最适pIj发生了 变化。空间结构的预测表明可能是由于分子表面两个螺旋减少，导致的该特性的变化。 从该嗜碱13一甘露聚糖酶与其它的B一甘露聚糖酶的一级结构的比较来看，嗜碱酶在 ～级结构上并没有统一的特征来解释它们的嗜碱性。 关键词嗜碱机理；B一甘露聚糖酶；结构与功能；易错PCR 圣!!垒些查兰星兰堡圭兰竺篓圣 ， ， STUDIESON 13 ALKALIPI·ⅡLICM匪CH口ⅥSM 一MANNANASEFROM 6．5 Abstract The mechanismof alkali—tolerant isahot hiigh proteins’stability topiccurrently,but to natureofthe arefew about owingcomplex mechanism，there it．Themechanismof reports alkali-tolerantB·mannanasefrom BacillusN16-5was high alkaliphilicsp studiedinthis research themechanismwaslearnedfromourwork． work,and partly The ofalkali·-tolerant13--mannanaseWassubclonedfroma gene largeplasmidcontaining the the in isthebasicworkfor gene，andexpressedgeneE．coli，which mutants selecting by PCR． error-prone PCRWaS standardPCRbu髓r Error—prone performedbyusing withCT-richdNTP mixturesand concentration selectionswere toselecta high M92+．Thehigh-through performed numberofm