小鼠胚胎干细胞分离及鉴定.pdfVIP

摘要 胚胎干细胞由于其独特的生物学特性，在体外研究胚胎的发生发育、新基因的发 现、药物筛选和致畸实验，以及作为组织移植、细胞治疗和基因治疗的细胞源、克隆 动物、转基因动物生产、发育生物学、动物和人类疾病模型、组织器官的修复和移 植等方面有着诱人的前景。四倍体胚胎补偿技术已经成为一个基本的实验技术，虽然 四倍体胚胎只能发育到怀孕中后期，但是四倍体与二倍体嵌合体广泛用于研究胚外发 育缺陷的相关基因功能。为了充分利用小鼠胚胎干(ES)细胞，就必须从众多小鼠品系 中分离Es细胞系。本实验的研究目的是分离不同的ES细胞系并通过制备畸胎瘤和四 倍体胚胎补偿技术来检测Es细胞的多能性。 本实验以小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层，利用高糖DMEM作为基础培养基，同 细胞系。 把Es细胞注入不同品系的小鼠皮下、睾丸质膜下及肾囊下，均得到了畸胎瘤， 且畸胎瘤包含3个胚层的衍生物。我们发现，睾丸质膜下移植Es细胞，似乎更容易长 出畸胎瘤，因此我们认为，睾丸质膜下移植ES细胞可能是检测ES细胞多能性的一个 简便易行的方法。 合，84．8％的胚胎发生融合。通过移植四倍体胚胎和二倍体胚胎来比较两种胚胎发育 潜力。将四倍体胚胎和二倍体胚胎分别随机移植到左右两侧子宫角，得出结论：四倍 体胚胎与二倍体胚胎附植率没有显著差异，四倍体胚胎前期的发育能力要优于二倍 d后开始死亡，个 体。两侧子宫角的胚胎附植率没有区别。四倍体胚胎发育到12．13 别发育到14．15d。实验没有得到出生的四倍体个体。 融合的胚胎培养24h后，86％的融合胚胎形成4细胞或4细胞以上胚胎。将四倍 ES细胞系聚合后得到1122枚嵌合囊 体4细胞胚胎分别与5个(C57BL／6Jxl29／Sv)F1 只存活1天，出生后未能哺乳，腹部有病变，肉眼可见鼓胀。胎儿出生重2，89。Es 细胞的遗传背景和生长状态、嵌合方法、体外培养环境、移植方法等都是影响获得 ES小鼠的因素。通过四倍体胚胎聚合技术可以简便而快速地从遗传修饰的杂种Es 细胞中获得完全由ES细胞发育而来的个体，为基因功能和人类疾病动物模型的研究 提供了一条有效途径。 关键词：胚胎干细胞；畸胎瘤；电融合；四倍体；ES小鼠 IsolationandIdentificationofMouse StemCells Embryonic Author：DI Keqian Supervisor：LIXiangyun and Major：AnimalGenetic*，BreedingReproduction Abstraet stem from Embryoniccells(ESOs)，derived ernbryos，are preimplantation undifferentiated．immortalcells of intoderivativesofall capabledifferentiating three EScellshavebeenused instudiesof embryonicgermlayers．Pluripotential extensively and themechanismofee