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布鲁氏菌介导的主小泛素化及抗凋亡机制的研究
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ADissertationSubmitted to
Shihezi University
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InPartialFulfillmentoftheRequirements
fortheDegreeof
DoctorofAgriculture
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By
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BByy
JianTong
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JJiiaannTToonngg
(animalsNutrition)
(animalsNutrition)
((aanniimmaallssNNuuttrriittiioonn))
DissertationSupervisor:Prof.Chenchangfu
Prof.Zhanghui
June,2013
I
II
中文摘要
类泛素化修饰主要是参与细胞周期调控、信号传导、转录调控、细胞凋亡、细胞
增殖与分化、蛋白转运、DNA 修复以及应激反应等多种细胞功能调控。目前,有关类
泛素对细菌介导的细胞生物进程变化研究较少。布鲁氏菌是一种典型的兼性胞内菌, 寄
生在宿主巨噬细胞内复制繁殖,对宿主细胞功能有很大的影响。因此,研究布鲁氏菌介
导对细胞内类泛素的变化与布鲁氏菌引起凋亡的影响具有重要意义。本研究主要包括以
下几方面:
1.鼠源类泛素蛋白SUMO1/2/3的原核表达、纯化及抗体的制备
经鉴定、测序成功构建原核表达载体pET-SUMO1/2/3。将其在大肠杆菌中表达,可
见相对分子质量约为30KD的蛋白带,而且在6h 时表达量最高。用蛋白纯化系统纯化
类泛素融合蛋白,免疫兔子,制备多克隆抗体血清经Western-blot分析表明表达的蛋白
具良好的反应原性。
2.布鲁氏菌介导对细胞类泛素表达影响的研究
布鲁氏菌M5-90和16M菌株分别侵染巨噬细胞后,通过免
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