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布拉氏酵母菌基敲除系统的构建及初步应用
符号及缩略词
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JflJP8JIJll2lllllIJoPlJJI磐
英文缩写 英文全称 中文名称
目录
中文摘要………………………………………………………………………………………．I
Abstract…………………………………………………………………………………………………………………．．III
1前言………………………………………………………………………………………………………………………．1
1．1＆boulardii生物学分类……………………………………………………………………1
1．3＆boulardii的作用机制及临床应用……………………………………………………。2
1．3．1Sboulardii的营养肠道的作用…………………………………………………………3
1．3．3S
1．3．7Sboulardii的抗癌作用…………………………………………………………………5
1．3．8Sboulardii对啮齿类枸橼酸杆菌的拮抗作用…………………………………………5
1．5基因敲除技术研究进展………………………………………………………．：…………5
1．5．1基因敲除技术概述………………………………………………………………………6
1．5．2噬菌体重组酶敲除系统………………………………………………………………．．6
1．5．3基因敲除技术在酿酒酵母中的应用……………………………………………………8
1．6本研究的目的与意义……………………………………………………………………．．8
2材料与方法………………………………………………………………………………。10
2．1试验材料…………………………………………………………………………………10
2．1．1质粒和菌株……………………………………………………………………………．10
2．1．2主要仪器和设备………………………………………………………………………10
2．1．3主要试剂………………………………………………………………………………10
2．1．4有关培养基和溶液的配制……………………………………………………………．11
2．2试验方法…………………………………………………………………………………13
2．2．1引物设计与合成………………………………………………………………………．13
2．2．2质粒的构建……………………………………………………………………………．15
2．2．3酵母菌的计数…………………………………………………………………………21
2．2．4抗生素的筛选…………………………………………………………………………21
2．2．5酵母基因组DNA的提取……………………………………………………………．21
2．2．6基因敲除盒的构建……………………………………………………………………．22
2．2．7布拉氏酵母菌的转染…………………………………………………………………．23
2．2．8
URA3基因的敲除………………………………………………………………………24
2．2．9
MCD4基因的敲除……………………………………………………………………．25
2．2．10PCR方法鉴定阳性转染子…………………………………………………………。26
2．2．11敲除基因重新导入实验………………………………………………………………26
2．2．12外源基因的删除………………………………………………………………………27
2．2．13生长曲线的测定………………………………………………………………………27
2．2．14葡聚糖的测定…………………………………………………………………………27
3试验结果………………………：………………………………
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